 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3595 | 回復(fù): 105 | |||
[交流]
PCR 在不同個(gè)體中擴(kuò)增效率不一致
|
|||
|
請教關(guān)于PCR擴(kuò)增效率問題，如圖，左1-9是不同個(gè)體，左10是不加DNA的對照，左11是marker。左7在目標(biāo)位置稍有痕跡，左9沒有目的條帶。目標(biāo)長度分別為80bp,160bp。 引物是半巢式引物，左右個(gè)一條引物，中間的引物和左端的引物預(yù)期也可以擴(kuò)增出條帶，所以可以看到兩條比較明顯的帶。 用的酶是Platinum SuperFi Green PCR Master Mix, 體系為：mix: 5ul, F1：1ul, R1: 1ul，R2:1ul，終濃度均為0.5uM DNA:1ul 超純水補(bǔ)足10ul 加樣過程是先把出DNA外的mix，引物混好，離心分裝后加DNA。 擴(kuò)增程序是按照說明書來的，應(yīng)該問題不大，caculated和block模型都用了，兩種程序?qū)蓷l帶的濃度有點(diǎn)影響，但都是有的個(gè)體擴(kuò)得出來，有的擴(kuò)不出來，圖示用的是block模型。 模版也測過濃度，大致都一樣，A260/280比2.0稍高，不超過0.1。這里放的只是10個(gè)樣品的帶，還擴(kuò)了其他個(gè)體，不管DNA濃度和A260/280怎么變，都有擴(kuò)出來的，也有擴(kuò)不出來的，大概有3/4的個(gè)體可以明顯地?cái)U(kuò)出預(yù)期的兩條帶。我一般會把不同的管按橫向一字排開，奇怪的是，擴(kuò)不出來的基本都是邊上的個(gè)體。 現(xiàn)在有三點(diǎn)懷疑：1、PCR儀受熱不均勻，但是網(wǎng)上搜了很多也沒搜到這樣的問題，實(shí)驗(yàn)室沒有別的PCR儀，又不方便去其他實(shí)驗(yàn)室做；2、樣品本身引物不同品種之間有差別；3、引物和DNA均是用TE溶解，可能會對擴(kuò)增有影響。希望各位提提建議，謝謝！ Labuser 2016-12-17 12_11.8_block method_30min.jpg |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有243人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 同一個(gè)昆蟲個(gè)體中得到不同的CDNA序列，為什么？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- Nature ： DNA甲基化最新研究及常用研究方法
已經(jīng)有43人回復(fù)
- 2010中科院微生物考博真題答案
已經(jīng)有39人回復(fù)
- ISSR分子標(biāo)記中用Popgene計(jì)算相關(guān)參數(shù)時(shí)樣本量的問題
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 腸子里的生物能活多少年？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 動植物樣品的采集及DNA樣品的提取(ZT)
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 電泳篩選SSR引物時(shí)，只跑出了一條帶，這樣正常嗎？是不是說明SSR引物沒有多態(tài)性？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 電泳篩選SSR引物時(shí)，只跑出了一條帶，這樣正常嗎？是不是說明SSR引物沒有多態(tài)性�。�
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 一種確定端粒長度的簡便方法----ebiotrade
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【分享】熒光定量PCR簡介
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【原創(chuàng)】碩士博士期間的收獲
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 浙江大學(xué)2006年分子生物學(xué)考博
已經(jīng)有8人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
中飛院航空鋰電池團(tuán)隊(duì)接受碩士生調(diào)劑
+1/74
-
歡迎報(bào)考贛南師范大學(xué)智能制造與未來能源學(xué)院
+2/64
-
艾里卡特 (Alicat) - 燃料電池測試系統(tǒng)與質(zhì)量流量和壓力儀表
+3/49
-
青島大學(xué)固態(tài)電池研究團(tuán)隊(duì)招收材料、化學(xué)、物理等方向博士研究生
+2/46
-
中山大學(xué)生醫(yī)工學(xué)院課題組招碩士生（納米材料/高分子/分析傳感/熒光免疫檢測背景）
+2/38
-
環(huán)境化學(xué)、地學(xué)、環(huán)境毒理方向，擅長污染物遷移轉(zhuǎn)化降解、分析檢測、計(jì)算模擬者優(yōu)先
+1/33
-
雙一流大學(xué)湘潭大學(xué)“化工過程模擬與強(qiáng)化”國家地方聯(lián)合工程研究中心招收各類博士生
+1/16
-
青島科技大學(xué)0860 調(diào)劑招生
+1/12
-
南京林業(yè)大學(xué)化工院有機(jī)合成方向碩士招調(diào)劑
+1/10
-
課題組招收專業(yè)代碼08開頭的學(xué)碩！
+1/9
-
寧夏大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院魏逸彬研究員課題組招聘啟事
+1/7
-
江西科技師范大學(xué) 材料與能源招收調(diào)劑研究生
+1/7
-
【博士招生】上海交通大學(xué)陳倩櫟課題組招收2026年申請-考核博士生1名（能源材料方向）
+1/4
-
哈工大韓飛課題組招收3D微納加工、光學(xué)工程、納米化學(xué)等方向博士生及博后（長期有效）
+1/3
-
青島大學(xué)物理科學(xué)學(xué)院國家級人才團(tuán)隊(duì)招收材料、物理、能源等相關(guān)專業(yè)調(diào)劑碩士研究生
+1/3
-
【博士招生】天津理工大學(xué)國家杰青王鐵課題組招收2026年博士研究生
+1/2
-
上海師范大學(xué)有機(jī)化學(xué)專業(yè)研究生招生
+1/2
-
海南師范大學(xué) 孫元元老師團(tuán)隊(duì)招2026級碩士生2名
+1/1
-
雙一流高校河南大學(xué)量子納米光子學(xué)課題組光學(xué)、凝聚態(tài)博士招生
+1/1
-
考研292求調(diào)劑
+1/1
8樓2016-12-19 12:35:46
27樓2016-12-19 13:22:37
簡單回復(fù)
frankfh2樓
2016-12-19 12:10
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
2016-12-19 12:22
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
2016-12-19 12:23
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
祝福
2016-12-19 12:25
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
最愛喝獸奶6樓
2016-12-19 12:26
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端
2016-12-19 12:35
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
2016-12-19 12:42
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
tan91410樓
2016-12-19 12:44
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
zhenwuhuang11樓
2016-12-19 12:48
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
jaylong212樓
2016-12-19 12:49
回復(fù)
慕雪丫頭13樓
2016-12-19 12:50
回復(fù)
ccwmxm14樓
2016-12-19 12:52
回復(fù)
dsctg15樓
2016-12-19 12:55
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
yaoyao14516樓
2016-12-19 12:56
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
y 發(fā)自小木蟲IOS客戶端
吸血人狼城17樓
2016-12-19 12:56
回復(fù)
longwave18樓
2016-12-19 12:57
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
祝福 發(fā)自小木蟲Android客戶端
清愁幽冰19樓
2016-12-19 12:57
回復(fù)
yexuqing20樓
2016-12-19 12:59
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
bush28621樓
2016-12-19 12:59
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
ajingne122樓
2016-12-19 13:02
回復(fù)
wdxmu23樓
2016-12-19 13:05
回復(fù)
f4189824樓
2016-12-19 13:05
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
好 發(fā)自小木蟲Android客戶端
gorgan25樓
2016-12-19 13:10
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
祝福 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ]
175297181126樓
2016-12-19 13:19
回復(fù)
YoungHjy28樓
2016-12-19 13:24
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端
wtbccq50529樓
2016-12-19 13:25
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
ellen_rock30樓
2016-12-19 13:33
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
!
在南極看極光31樓
2016-12-19 13:47
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
納米材料75332樓
2016-12-19 13:49
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
蓮花如夢33樓
2016-12-19 13:51
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
唱不完一首歌34樓
2016-12-19 13:58
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
gg
bj200898935樓
2016-12-19 14:00
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
多啦A夢283336樓
2016-12-19 14:02
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
sz_kebaoyuan37樓
2016-12-19 14:08
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
343538樓
2016-12-19 14:13
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
只用一顆真心39樓
2016-12-19 14:14
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
chejiacun40樓
2016-12-19 14:17
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
包子home41樓
2016-12-19 14:22
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
三八洲42樓
2016-12-19 14:24
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
多啦C夢060143樓
2016-12-19 14:25
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
tzynew44樓
2016-12-19 14:27
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
tableman45樓
2016-12-19 14:28
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
祝福了。
神蠱溫皇46樓
2016-12-19 14:35
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
祝福 發(fā)自小木蟲Android客戶端
吃我化骨綿掌47樓
2016-12-19 14:35
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
ff
低價(jià)核磁48樓
2016-12-19 14:38
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
yuzhichao49樓
2016-12-19 14:42
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
祝福
2016-12-19 14:42
回復(fù)
dblydxgl(金幣+1): 謝謝參與
ff
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 dblydxgl 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩，一志愿湖南大學(xué)，初試成績338 +4 | YYYYYNNNNN 2026-03-26 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工272求調(diào)劑 +9 | 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +7 | 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 材料與化工考研調(diào)劑
+17
|
孅華 2026-03-22 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +7 | 孅華 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +4 | AZMK 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 安徽大學(xué)專碩生物與醫(yī)藥專業(yè)(086000)324分，英語已過四六級，六級521，求調(diào)劑 +4 | 美味可樂雞翅 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑，一志愿南農(nóng)083200食品科學(xué)與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調(diào)劑 +3 | xgbiknn 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[碩博家園] 招收生物學(xué)/細(xì)胞生物學(xué)調(diào)劑 +3 | IceGuo 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學(xué)，080500學(xué)碩，總分317分求調(diào)劑 +4 | 舉個(gè)栗子oi 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化求調(diào)劑 +3 | Jsman 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 【雙一流院校新能源、環(huán)境材料，材料加工與模擬招收大量調(diào)劑】 +4 | Higraduate 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿河工大 081700 276求調(diào)劑 +4 | 地球繞著太陽轉(zhuǎn) 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 263求調(diào)劑 +6 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | plum李子 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +7 | 小羊睡著了? 2026-03-23 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 300求調(diào)劑，材料科學(xué)英一數(shù)二 +5 | leaflight 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 305分求調(diào)劑（食品工程） +5 | Sxy112 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 石河子大學(xué)（211、雙一流）碩博研究生長期招生公告 +3 | 李子目 2026-03-22 | 3/150 |
|