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天使托專(zhuān)家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
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一種確定端粒長(zhǎng)度的簡(jiǎn)便方法----ebiotrade
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DNA每復(fù)制一次，端粒就縮短一點(diǎn)。一旦端粒消耗殆盡，染色體則易于突變而導(dǎo)致某些疾病如癌癥。因此，對(duì)于研究人員來(lái)說(shuō)，準(zhǔn)確而可重復(fù)地測(cè)量端粒長(zhǎng)度很重要。為此，QIAGEN的研究人員開(kāi)發(fā)出一種簡(jiǎn)便且自動(dòng)化的qPCR方法，利用市售的標(biāo)準(zhǔn)化試劑來(lái)測(cè)量端粒長(zhǎng)度。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，這種方法對(duì)于外周血細(xì)胞是高度重復(fù)而準(zhǔn)確的。 端粒是真核生物染色體線(xiàn)性DNA分子末端的結(jié)構(gòu)。形態(tài)學(xué)上，染色體DNA末端膨大成粒狀，像兩頂帽子那樣蓋在染色體兩端，因而得名。端粒的主要功能是保護(hù)染色體末端不被降解，避免染色體融合，從而維持染色體的穩(wěn)定性。 DNA每復(fù)制一次，端粒就縮短一點(diǎn)。一旦端粒消耗殆盡，染色體則易于突變而導(dǎo)致某些疾病如癌癥。因此，對(duì)于研究人員來(lái)說(shuō)，準(zhǔn)確而可重復(fù)地測(cè)量端粒長(zhǎng)度很重要。 對(duì)于端粒長(zhǎng)度的測(cè)定，目前主要有三種方法：Southern blot，這被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn)方法，但是耗時(shí)耗力，且需要大量的DNA；flow-FISH，它綜合了流式細(xì)胞儀和熒光原位雜交，但技術(shù)復(fù)雜，且需要完整的細(xì)胞才能分析；定量PCR，這種方法簡(jiǎn)便快速，且靈敏度高，但缺乏標(biāo)準(zhǔn)化。 為此，QIAGEN的研究人員開(kāi)發(fā)出一種簡(jiǎn)便且自動(dòng)化的qPCR方法，利用市售的標(biāo)準(zhǔn)化試劑來(lái)測(cè)量端粒長(zhǎng)度。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，這種方法對(duì)于外周血細(xì)胞是高度重復(fù)而準(zhǔn)確的。 分析利用了Rotor-Gene SYBR Green Kit，在Rotor-Gene Q實(shí)時(shí)定量PCR儀上開(kāi)展。他們用單個(gè)參考基因來(lái)標(biāo)準(zhǔn)化端粒分析的Ct值。每個(gè)樣品的端粒長(zhǎng)度是基于端粒與單拷貝基因的比值（T/S比值）。端粒長(zhǎng)度表示為相對(duì)的T/S比值。 這種qPCR方法使用簡(jiǎn)單，且對(duì)于人類(lèi)外周血細(xì)胞重復(fù)性高。qPCR分析的結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)Southern blot方法所獲得結(jié)果的相關(guān)性良好，不過(guò)，qPCR方法所需的DNA少，只需要1 ng基因組DNA，且分析100個(gè)端粒目標(biāo)只需要90分鐘，而Southern blot需要至少2天。 研究人員評(píng)估了299名不同年齡（0-99歲）健康個(gè)體的端粒。結(jié)果表明端粒長(zhǎng)度和年齡成負(fù)相關(guān)。他們還利用Southern blot和qPCR方法對(duì)13名個(gè)體的端粒長(zhǎng)度進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)這兩種方法的結(jié)果之間呈相當(dāng)高的相關(guān)性。 在Rotor-Gene Q循環(huán)儀上開(kāi)展的實(shí)時(shí)定量PCR為分析端粒長(zhǎng)度提供了一種快速而靈敏的方法。它為研究基因組不穩(wěn)定性、心臟病和中風(fēng)、癌癥發(fā)展與治療提供了一種強(qiáng)大的工具，并將協(xié)助研究人員腫瘤發(fā)展過(guò)程中端�？s短的程度和重要性。 Rotor-Gene Q以其獨(dú)特的離心轉(zhuǎn)子式設(shè)計(jì)成為現(xiàn)今最精確的多功能定量PCR儀之一。每個(gè)管子在反應(yīng)倉(cāng)中勻速旋轉(zhuǎn)，所有樣本在快速熱循環(huán)過(guò)程中都處于均一的溫度下。檢測(cè)過(guò)程保持同樣的均一性。當(dāng)管子對(duì)準(zhǔn)檢測(cè)光路是，樣品就被激發(fā)，通過(guò)一束短光路快速采集熒光信號(hào)。溫度和光學(xué)的均一性確保靈敏、精確和快速的實(shí)時(shí)定量PCR分析，同時(shí)也減少了樣品間差異和邊緣效應(yīng)。 |
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