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winehappyue新蟲 (初入文壇)
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[交流]
反轉(zhuǎn)錄后發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增的cDNA含內(nèi)含子 已有5人參與
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求各位大神幫忙�。�！ 反轉(zhuǎn)錄PCR后，發(fā)現(xiàn)目的條帶中含有一段100bp左右的內(nèi)含子序列！ 現(xiàn)懷疑是提RNA時(shí)DNA沒有消化完全。 求問是否可以在得到的RNA中直接加入DNA消化酶，再反轉(zhuǎn)？如果可以，有推薦的產(chǎn)品么，加入量是多少？ |
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winehappyue
新蟲 (初入文壇)
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3樓2017-01-02 10:16:14
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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可以，但是消化完基因組DNA后，還要把rna再抽提一遍，去除里面的酶，鹽離子等等。用dna酶I，具體用量看說明書就行了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-12-30 22:38:06
4樓2017-01-02 10:53:47
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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另外，消化完后，抽提的時(shí)候要在體系里面補(bǔ)幾百微升的無rna酶的滅菌雙蒸水。 還要注意保持低溫，不要讓rna降解了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2017-01-02 10:57:50
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