 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 5534 | 回復(fù): 19 | ||
upwardkl新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
LB平板培養(yǎng)大腸桿菌，不長(zhǎng)菌，或零星幾個(gè) 已有5人參與
|
|
|
近一個(gè)多月以來，自制的感受態(tài)細(xì)胞（Top10和DH5&）,測(cè)OD600值，均為0.5左右， 后將T-A克隆的產(chǎn)物做轉(zhuǎn)化，使用的平板為L(zhǎng)B固體平板，平板涂布，37度培養(yǎng)，至少要等14-16h后，才能看到零星的菌，且特小，有時(shí)候甚至沒有菌，， 尋求原因和實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)和幫助！ 謝謝！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有132人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+5, 鼓勵(lì)熱心回帖交流 2017-03-05 08:54:53
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+5, 鼓勵(lì)熱心回帖交流 2017-03-05 08:54:53
|
可以試著測(cè)以下感受態(tài)的效價(jià)，或者直接買個(gè)感受態(tài)，我用的是諾維贊家的，價(jià)格便宜，用的也不錯(cuò) 感受態(tài)測(cè)效價(jià)方法是：轉(zhuǎn)1ng高質(zhì)量的質(zhì)粒到100μl感受態(tài)中 ——> 按克隆轉(zhuǎn)化流程：冰上靜置、熱激、冰冷、補(bǔ)培養(yǎng)基、搖菌 ——> 取1/10涂板，培養(yǎng)過夜 ——> 長(zhǎng)1000個(gè)單菌落，效價(jià)為10^7 舉例子： 假設(shè)取0.1ng pUC19質(zhì)粒轉(zhuǎn)入100μl待測(cè)的感受態(tài)細(xì)菌中，按常規(guī)轉(zhuǎn)化步驟進(jìn)行冰浴和熱擊，加入900μlSOC培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)（此時(shí)DNA濃度為0.1ng DNA/ml，這里也可使用LB培養(yǎng)基，但最后得到的克隆菌的數(shù)目可能會(huì)降低）。然后再用SOC培養(yǎng)基進(jìn)行1:10稀釋（此時(shí)DNA濃度變?yōu)?.01ng DNA/ml），分別取100μl（含總量為0.001ng的DNA）涂布至兩個(gè)平行的平板中。如果最后產(chǎn)生的菌落數(shù)為200 個(gè)（兩個(gè)平板菌落的平均數(shù)），則轉(zhuǎn)化效率為： 200 cfu/0.001ng = 2×10^8 cfu/μg |
7樓2017-01-11 10:34:27
wskisaac
金蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 27 (小學(xué)生)
- 金幣: 7307.8
- 散金: 2398
- 紅花: 21
- 帖子: 1110
- 在線: 477.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 2039377
- 注冊(cè): 2012-10-01
- 專業(yè): 化學(xué)生物學(xué)與生物有機(jī)化學(xué)
|
建議先從公司買商業(yè)感受態(tài)，以此為基礎(chǔ)做自己感受態(tài)。OD最好0.3-0.4最好。先陽轉(zhuǎn)質(zhì)粒試試，別先做克隆。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
upwardkl9樓2017-01-11 15:52:07
2樓2017-01-10 16:09:36
4樓2017-01-10 21:29:16
010308Jing
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 3149.2
- 散金: 73
- 紅花: 6
- 帖子: 552
- 在線: 125.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 2146845
- 注冊(cè): 2012-11-25
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
5樓2017-01-10 21:43:13
6樓2017-01-11 00:00:24
8樓2017-01-11 15:25:10
wskisaac
金蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 27 (小學(xué)生)
- 金幣: 7307.8
- 散金: 2398
- 紅花: 21
- 帖子: 1110
- 在線: 477.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 2039377
- 注冊(cè): 2012-10-01
- 專業(yè): 化學(xué)生物學(xué)與生物有機(jī)化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
就用一般的氯化鈣方法做就好，網(wǎng)上很多，一查就知道。關(guān)鍵是菌不要長(zhǎng)過了，和氯化鈣要純。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
12樓2017-01-12 07:51:52
13樓2017-01-12 09:55:08
貓咪先生
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 55
- 帖子: 6
- 在線: 2.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 3484773
- 注冊(cè): 2014-10-19
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫相關(guān)疾病其他科學(xué)問題
14樓2017-01-12 10:30:52
upwardkl
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1312.8
- 紅花: 2
- 帖子: 41
- 在線: 9.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 3101077
- 注冊(cè): 2014-03-30
- 專業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
3樓2017-01-10 20:37:23
upwardkl
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1312.8
- 紅花: 2
- 帖子: 41
- 在線: 9.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 3101077
- 注冊(cè): 2014-03-30
- 專業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
10樓2017-01-11 16:40:05
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 upwardkl 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等調(diào)劑 +5 | 哇呼哼呼哼 2026-03-27 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +6 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調(diào)劑 +3 | Micky11223 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
[考研] 085600材料與化工306 +10 | z1z2z3879 2026-03-21 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調(diào)劑 +3 | xgbiknn 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +8 | hanamiko 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +11 | junqihahaha 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學(xué)，080500學(xué)碩，總分317分求調(diào)劑 +4 | 舉個(gè)栗子oi 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +7 | prayer13 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 初試270分 求調(diào)劑 +6 | 谷雨上岸 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +6 | 生如夏花… 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿河工大 081700 276求調(diào)劑 +4 | 地球繞著太陽轉(zhuǎn) 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 263求調(diào)劑 +6 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 李李不服輸 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | 話梅糖111 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +7 | 小羊睡著了? 2026-03-23 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料專碩找調(diào)劑 +5 | 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 26申博自薦 +3 | whh869393 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 十三加油 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[論文投稿] 急發(fā)核心期刊論文 +3 | 賢達(dá)問津 2026-03-23 | 5/250 |
|