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轉(zhuǎn)染的時候，質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑加的順序 已有6人參與
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轉(zhuǎn)染的時候，是質(zhì)粒加到轉(zhuǎn)染試劑(如lipo)還是轉(zhuǎn)染試劑加到質(zhì)粒中，因為在用fermentas的時候，是直接混合，沒有分管稀釋的，所以轉(zhuǎn)染試劑先加就不用換槍頭，如果質(zhì)粒先加就需要換槍頭。但是加的順序?qū)D(zhuǎn)染的影響還是要考慮的。。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2017-01-22 15:55:16
engreen2016
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3樓2017-04-28 10:57:16
4樓2018-09-20 15:18:26
5樓2018-12-17 09:24:06
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我們一般都是直接按照說明書操作的，方法步驟如下: 貼壁/懸浮細胞瞬時轉(zhuǎn)染操作流程(以24孔板轉(zhuǎn)染為例) A. 細胞接種: 1.轉(zhuǎn)染前24小時左右對細胞進行轉(zhuǎn)接，接種密度約為每孔0.3~1×105個細胞； 2.過夜培養(yǎng)。 B. DeofectEU /DNA復(fù)合物包裝(該步完成后應(yīng)立即轉(zhuǎn)染): 1.在1.5 ml無菌離心管中加入50μl無血清培養(yǎng)基，并添加適量的轉(zhuǎn)染試劑(2~5μl/μg DNA，參見下表) 。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5~10分鐘。 2.在1.5 ml無菌離心管中加入50μl無血清培養(yǎng)基，并添加適量的DNA (0.8~1μgDNA/孔， 參見附表)。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5~10分鐘。 3.將DeofectEU-培養(yǎng)基混合物滴加至DNA-培養(yǎng)基混合物中，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15~20分鐘后，立即轉(zhuǎn)染。注意： DeofectEU-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。 C.轉(zhuǎn)染: 注意：DeofectEU 在完全培養(yǎng)基中(基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加血清)具有最高的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清培養(yǎng)基。 1.如特殊情況，可在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細胞密度太大、營養(yǎng)不足導(dǎo)致的細胞死亡。 2.將步驟B制備的復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中。輕輕晃動培養(yǎng)皿以使復(fù)合物均勻分布。 3.過夜培養(yǎng)24~48小時。 4.注意:如果轉(zhuǎn)染后需要更換新鮮培養(yǎng)基，請于加入DeofectEU /DNA復(fù)合物12~24小時后進行。培養(yǎng)基更換后，孵育24~48小時后再進行后續(xù)實驗。 5.收獲細胞，進行后續(xù)實驗。 |
6樓2019-03-11 14:43:10
Explor
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| 百代的RFectSP Plasmid 使用非常方便，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA混合，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。具體你可以參照說明書，或者咨詢www.biodai.com.cn看看。 |
7樓2019-10-29 13:56:14
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8樓2019-10-29 15:23:02
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