 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1142 | 回復(fù): 6 | ||
麗姐萍妹新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
[求助]
載體構(gòu)建 已有1人參與
|
|
我準(zhǔn)備將載體中的GUS切掉 插入我的目的片段 可是GUS前后的雙切酶把我的載體切成了好幾個(gè)片段 后期準(zhǔn)備選用單酶切 用Pml1酶進(jìn)行單酶切 可是我的片段插入到GUS的后面 表達(dá)的問(wèn)題怎么解決��？我的目的片段有起始密碼子和終止密碼子，這個(gè)要怎么處理啊 目的片段上的起始密碼子需要去掉嗎？還有GUS上的密碼子呢？不懂啊 實(shí)驗(yàn)小白 對(duì)于這塊不太清楚呢 求助！ @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan @youlinglyw 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有257人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
jurkat.1640
至尊木蟲(chóng) (文壇精英)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 908 (博后)
- 金幣: 17175
- 散金: 1654
- 紅花: 121
- 沙發(fā): 41
- 帖子: 14525
- 在線: 2184.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 514340
- 注冊(cè): 2008-02-28
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 病毒學(xué)
2樓2017-02-08 17:18:45
yudaoqian88
至尊木蟲(chóng) (知名作家)
不良人
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 67 (初中生)
- 金幣: 25721
- 散金: 410
- 紅花: 34
- 沙發(fā): 15
- 帖子: 7665
- 在線: 966.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1430329
- 注冊(cè): 2011-10-07
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 作物種質(zhì)資源與遺傳育種學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
樓主應(yīng)該是想超表達(dá)你的基因吧？ 前面說(shuō)用載體gus前后的內(nèi)切酶切的很亂，可能是你的質(zhì)粒發(fā)生了變化，樓主可以劃線純化質(zhì)粒，多挑幾個(gè)菌落提取質(zhì)粒，做雙切看是否有對(duì)的�；蛘邚膭e人或別的課題要這個(gè)載體用。 再者，超表達(dá)的載體很多，不妨更換載體，避開(kāi)這個(gè)問(wèn)題，比你慢慢找答案快的多。 還有，一些短的標(biāo)簽是可以放到基因的兩端的，gus我還不確定是否可以，因?yàn)樗_實(shí)好大。不知道是否妨礙目的基因的功能。如果放的話，只要保證前面的基因去掉終止密碼子，且不會(huì)造成后面基因發(fā)生移碼，不會(huì)提前出現(xiàn)終止子便可。 最后，樓主早看看單酶切插入片段的方向是否和啟動(dòng)子是順著的，反了也不行。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2017-02-09 01:08:14
|
可能你剛開(kāi)始就沒(méi)有分析載體的酶切位點(diǎn)，所以雙酶切切出很多條帶，如果這樣，可以保證GUS后酶切位點(diǎn)為PmL1酶，且為單位點(diǎn)，過(guò)表達(dá)或沉默基因最好插入GUS前面，插入后面也不是不可以，但是不能夠保證基因表達(dá)或者沉默，如果GUS前只有一個(gè)酶切位點(diǎn)能夠選擇，那就只能這樣了，不用去除GUS終止密碼子。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2017-02-09 01:33:22
麗姐萍妹
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1410.4
- 散金: 70
- 紅花: 5
- 帖子: 925
- 在線: 55小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4017097
- 注冊(cè): 2015-08-11
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 觀賞園藝學(xué)
|
我在做之前有分析酶切位點(diǎn)的 因?yàn)橛玫妮d體是優(yōu)化過(guò)的了 所以具體序列我是不知道的 大體的我有分析過(guò)酶切位點(diǎn)的 那如果GUS后面插入目的片段不能表達(dá)的話 插入也沒(méi)用啊 密碼子不需要去除的嗎？有沒(méi)有做雙價(jià)載體的啊 我是做植物的 你們是用什么載體呢？公司有賣(mài)嗎？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2017-02-09 23:01:24
麗姐萍妹
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1410.4
- 散金: 70
- 紅花: 5
- 帖子: 925
- 在線: 55小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4017097
- 注冊(cè): 2015-08-11
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 觀賞園藝學(xué)
6樓2017-02-09 23:02:54
|
我做病原菌的，我們用的載體是從國(guó)外合作院校整過(guò)來(lái)的，我做的是帶有熒光標(biāo)記載體構(gòu)建，公司沒(méi)有 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
7樓2017-02-09 23:20:07
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 麗姐萍妹 的主題更新
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
 一志愿 西北大學(xué) 總分282 英語(yǔ)一62 求調(diào)劑
+7
|
18419759900 2026-03-25 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +10 | 幸運(yùn)的醬醬 2026-03-22 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +7 | 邱gl 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿9，初試成績(jī)：338，四六級(jí)已過(guò)，有科研經(jīng)歷，求調(diào)劑！ +3 | Zuhui0306 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +3 | Qshers 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +3 | 雨清天晴 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +4 | 崔wj 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 招收生物學(xué)/細(xì)胞生物學(xué)調(diào)劑 +3 | IceGuo 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 304材料求調(diào)劑
+4
|
鐘llll 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 349求調(diào)劑 +5 | 杰斯塔里斯 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化求調(diào)劑 +3 | Jsman 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 蘆lty 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 325求調(diào)劑 +3 | Aoyijiang 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)材料與化工（085600）296求調(diào)劑 +9 | 稻妻小編 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 打過(guò)很多競(jìng)賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3 | askeladz 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求調(diào)劑 +4 | 李李不服輸 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 086003食品工程求調(diào)劑 +6 | 淼淼111 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 384求調(diào)劑 +3 | 子系博 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 工科0856求調(diào)劑 +5 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-21 | 3/150 |
|