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瀟湘妃子。鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
金線蓮植物基因組DNA提取、純化及PCR實(shí)驗(yàn)問(wèn)題
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求助各位大神兩個(gè)問(wèn)題： 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模何以谧鼋鹁�蓮這種中草藥植物基因組DNA提取的實(shí)驗(yàn)，然后特定序列PCR擴(kuò)增后，對(duì)不同來(lái)源的藥材做一個(gè)鑒別。 1、實(shí)驗(yàn)遇到的問(wèn)題：買(mǎi)的是天恩澤的DNA提取試劑盒，可是提取出來(lái)后檢測(cè)核酸濃度，才只有10ng/μl左右，而且在260nm處的吸收值只有0.2左右，280nm處的吸收值在0.1左右，A260/A280的比值只有1.4~1.5，不懂這些數(shù)據(jù)說(shuō)明什么，同學(xué)說(shuō)這個(gè)濃度就等于幾乎沒(méi)提出來(lái)，還是提取的DNA雜質(zhì)量太多了？接下來(lái)應(yīng)該從哪些方面著手，有什么好的純化方法，可以通過(guò)酚、氯仿等來(lái)提純嗎？ 2、接著上面的實(shí)驗(yàn)繼續(xù)說(shuō)，提取出來(lái)基因組DNA后，計(jì)劃的是選擇ITS2這段基因，可是因?yàn)椴恢涝诮鹁�蓮中這個(gè)序列的堿基組成，沒(méi)法設(shè)計(jì)特定引物。同學(xué)讓我用了他另外一種植物ITS2序列設(shè)計(jì)出來(lái)的引物，我用他這個(gè)引物按照購(gòu)買(mǎi)的PCR試劑盒操作，凝膠成像結(jié)果顯示，確實(shí)有擴(kuò)增出來(lái)一個(gè)大約500bp的條帶�？涩F(xiàn)在又有人說(shuō)，因?yàn)檫@個(gè)不是針對(duì)我這種植物設(shè)計(jì)出的特定引物，即使擴(kuò)增出來(lái)，有條帶顯示，但無(wú)法說(shuō)明該條帶是我的目的序列（也就是ITS2）所擴(kuò)增出來(lái)的條帶，所以我現(xiàn)在又有點(diǎn)困惑了…… 這樣針對(duì)A植物ITS2序列設(shè)計(jì)的引物，能用于擴(kuò)增B植物的ITS2序列嗎？ 如果不可以的話，有沒(méi)有對(duì)這方面比較了解的同學(xué)可以指導(dǎo)一下，我到底應(yīng)該如何才能知道我這種植物某一特定基因的序列組成呢？ 查閱文獻(xiàn)，大家做的比較多的是質(zhì)粒DNA，或者是細(xì)胞、真菌的，關(guān)于植物的文獻(xiàn)實(shí)在是沒(méi)有找到相關(guān)的，小碩一枚，剛開(kāi)始做分子生物學(xué)這塊兒，實(shí)在是不懂的問(wèn)題一堆，懇請(qǐng)各位答疑解惑啊，不勝感激�。�！ |
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luzhid
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2樓2021-09-07 10:50:24
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