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weizengmiao新蟲 (小有名氣)
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[求助]
原核表達重組質粒酶切求助�。。。。。。。�！ 已有1人參與
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| 各位老師，我的重組質粒大小在6600kb左右，pcr結果陽性，重組質粒設計引物，然后測序，結果也證實構建成功的。但是我酶切無數(shù)次了都沒有切除我的900 bp的條帶。設計的酶切位點是EcoRI和KpnI，所用的緩沖液是T+BSA。酶切體系為 質粒 5 uL、酶各1 uL、緩沖液 1 uL，酶切體系為20 uL。酶切時間2 h、3 h、4 h、12 h 都做過，都沒有目的片段，只有一條比重組質粒小一點的條帶。有沒有老師也遇到過這種情況呀？我問題出在哪里呢？快絕望了。求指導呀�。。。� |
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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從你提供的信息，兩個可能。1，buffer要用2ul吧？ 2. 你質粒濃度多少？感覺你切開了，但量不夠。最好來張膠圖 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2017-02-19 20:20:55
weizengmiao
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 239
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- 專業(yè): 獸醫(yī)傳染病學
3樓2017-02-21 22:32:35
PH=6
新蟲 (初入文壇)
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4樓2019-07-16 10:54:07
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