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weizengmiao新蟲 (小有名氣)
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[求助]
原核表達(dá)重組質(zhì)粒酶切求助�。。。。。。。。� 已有1人參與
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| 各位老師，我的重組質(zhì)粒大小在6600kb左右，pcr結(jié)果陽(yáng)性，重組質(zhì)粒設(shè)計(jì)引物，然后測(cè)序，結(jié)果也證實(shí)構(gòu)建成功的。但是我酶切無(wú)數(shù)次了都沒(méi)有切除我的900 bp的條帶。設(shè)計(jì)的酶切位點(diǎn)是EcoRI和KpnI，所用的緩沖液是T+BSA。酶切體系為 質(zhì)粒 5 uL、酶各1 uL、緩沖液 1 uL，酶切體系為20 uL。酶切時(shí)間2 h、3 h、4 h、12 h 都做過(guò)，都沒(méi)有目的片段，只有一條比重組質(zhì)粒小一點(diǎn)的條帶。有沒(méi)有老師也遇到過(guò)這種情況呀？我問(wèn)題出在哪里呢？快絕望了。求指導(dǎo)呀！！�。� |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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從你提供的信息，兩個(gè)可能。1，buffer要用2ul吧？ 2. 你質(zhì)粒濃度多少？感覺(jué)你切開了，但量不夠。最好來(lái)張膠圖 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2017-02-19 20:20:55
weizengmiao
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
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- 專業(yè): 獸醫(yī)傳染病學(xué)
3樓2017-02-21 22:32:35
PH=6
新蟲 (初入文壇)
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- 帖子: 15
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- 專業(yè): 植物學(xué)研究的新技術(shù)、新方
4樓2019-07-16 10:54:07
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