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圓加leaf新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
SDS-PAGE電泳圖：這是不是沒(méi)有表達(dá)目標(biāo)蛋白？
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本人用pET24a轉(zhuǎn)了段基因進(jìn)BL21，想表達(dá)一個(gè)蛋白，是43.5kDa的。加誘導(dǎo)劑后取上清跑電泳，結(jié)果如圖，想請(qǐng)問(wèn)各位前輩，這是不是代表沒(méi)有表達(dá)出目標(biāo)蛋白？摸索四個(gè)濃度，不加誘導(dǎo)劑為對(duì)照，分別誘導(dǎo)6h 和8h。第一次做這種實(shí)驗(yàn)，這是第一次跑，跑的其實(shí)很丑，把握不太好，還請(qǐng)大家多多 提提意見(jiàn)，我好以后優(yōu)化 IMG_20170223_105600_副本_副本.jpg IMG_20170223_105600_副本1.jpg |
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2樓2017-02-24 13:50:04
| 祝福 |
3樓2017-02-24 13:51:23
4樓2017-02-24 14:01:10
qi7an
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圓加leaf: 金幣+1, 因?yàn)橄胫凑w表達(dá)也是不好的，最主要是上清有，就只做了上清 2017-02-24 15:09:25
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圓加leaf: 金幣+1, 因?yàn)橄胫凑w表達(dá)也是不好的，最主要是上清有，就只做了上清 2017-02-24 15:09:25
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應(yīng)該是沒(méi)有表達(dá)。為什么沒(méi)有點(diǎn)包涵體的樣品？有可能是包涵體表達(dá)呢？很久沒(méi)做表達(dá)了。小木蟲(chóng)上一定有很多牛人。祝福。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2017-02-24 14:03:38
6樓2017-02-24 14:08:25
13132551195
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圓加leaf: 金幣+1, 好的，謝謝 2017-02-24 16:12:47
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有很少吧�？赡馨w表達(dá)了 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
7樓2017-02-24 16:01:41
夏天的普洱茶
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圓加leaf: 金幣+3, 好的，那一般沉淀要怎么處理？濃度一般用幾個(gè)來(lái)試比較好？誘導(dǎo)時(shí)間又從什么時(shí)候開(kāi)始收來(lái)跑電泳比較好，現(xiàn)在感覺(jué)好像0h，2h，這些時(shí)間沒(méi)必要收來(lái)跑電泳 2017-02-28 09:27:56
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圓加leaf: 金幣+3, 好的，那一般沉淀要怎么處理？濃度一般用幾個(gè)來(lái)試比較好？誘導(dǎo)時(shí)間又從什么時(shí)候開(kāi)始收來(lái)跑電泳比較好，現(xiàn)在感覺(jué)好像0h，2h，這些時(shí)間沒(méi)必要收來(lái)跑電泳 2017-02-28 09:27:56
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無(wú)誘導(dǎo)劑濃度上樣有點(diǎn)高，上清液和沉淀都要上樣，目前看是沒(méi)有表達(dá)或者表達(dá)量非常少。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
8樓2017-02-24 20:50:10
小瓜子
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9樓2017-03-16 15:57:36
lws9930
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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SDS-PAGE看不出�？赡苡斜磉_(dá)，只是量很少。做個(gè)Western blot看看就知道了。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
10樓2017-03-17 12:10:23
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