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沉淪魔之不朽銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
請教一下小鼠皮膚組織勻漿快捷有效的制法
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在制作小鼠皮膚組織勻漿的時(shí)候,發(fā)現(xiàn)皮膚組織韌性特別高。 試了高速剪切,結(jié)果粘在刀頭上切不碎; 用手持式勻漿器倒是有效果但是一小時(shí)才能磨碎一個(gè)樣品。。手酸啊。樣品多的時(shí)候受不了啊。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
銅蟲 (小有名氣)
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1、取肝臟1g,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,放入5或10ml的小燒杯內(nèi) 2、用移液管量取0.86%冷生理鹽水,生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍,用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿介質(zhì)或生理鹽水于燒杯中,用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天然時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行,將盛有組織的小燒杯放入冰水中)。 3、手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿,左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8分鐘),充分研碎,使組織勻漿化。 4、將制備好的10%勻漿用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)3000r/min左右離心10~15分鐘,若檢測ATP酶,則只需要1000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,將離心好的勻漿留下上清棄下面沉淀。 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種測定 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
銅蟲 (小有名氣)
新蟲 (初入文壇)
銅蟲 (初入文壇)
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你好啊,我自己摸索的處理方法: 1.小鼠皮膚取的時(shí)候,最好麻醉后活體取,小鼠一旦死亡,皮膚馬上皺縮,不好定量也不好取下。 2.取皮膚的時(shí)候用眼科剪,提起皮膚后慢慢剪,不要剪到皮下組織,雙側(cè)腎區(qū)筋膜血管比較多,要格外仔細(xì)。 3.取下之后,放入PBS(要求高)或生理鹽水(要求不高)中洗去殘留的血液,然后用手術(shù)刀輕輕刮去皮下脂肪,取得時(shí)候操作好的話,皮下脂肪一般不多。 4.勻漿的時(shí)候,手持式玻璃勻漿器,最簡便最便宜,幾塊錢一個(gè),但是比較耗費(fèi)人力而且研磨過程會(huì)發(fā)熱,可能會(huì)對一些不穩(wěn)定成分產(chǎn)生影響。有專門的冷凍研磨勻漿機(jī),不過要十來萬,看經(jīng)費(fèi)。 5.我現(xiàn)在還是用的手持式玻璃勻漿器,研磨10min,每隔2.5min活動(dòng)混勻一次。取上層乳白色勻漿液,離心過濾,-20℃保存帶用。根據(jù)用途可能還需要除蛋白除磷脂等前處理操作。。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
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大神留步,最近也在做這個(gè),但是wb總是做不出來,除了內(nèi)參什么條帶都沒有,請問您有什么心得嗎?有沒有可以參考的Protocol啥的?感謝! 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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