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沉淪魔之不朽銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
請教一下小鼠皮膚組織勻漿快捷有效的制法
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在制作小鼠皮膚組織勻漿的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)皮膚組織韌性特別高。 試了高速剪切，結(jié)果粘在刀頭上切不碎； 用手持式勻漿器倒是有效果但是一小時(shí)才能磨碎一個(gè)樣品。。手酸啊。樣品多的時(shí)候受不了啊。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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1、取肝臟1g，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，放入5或10ml的小燒杯內(nèi) 2、用移液管量取0.86％冷生理鹽水，生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍，用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿介質(zhì)或生理鹽水于燒杯中，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行，將盛有組織的小燒杯放入冰水中）。 3、手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿，左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動研磨數(shù)十次（6～8分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。 4、將制備好的10％勻漿用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)3000r/min左右離心10～15分鐘，若檢測ATP酶，則只需要1000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，將離心好的勻漿留下上清棄下面沉淀。 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種測定 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-03-04 13:19:21
Jerry瀟瀟
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3樓2017-03-04 13:19:54
lumeiniu
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4樓2017-06-24 09:36:02
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你好啊，我自己摸索的處理方法： 1.小鼠皮膚取的時(shí)候，最好麻醉后活體取，小鼠一旦死亡，皮膚馬上皺縮，不好定量也不好取下。 2.取皮膚的時(shí)候用眼科剪，提起皮膚后慢慢剪，不要剪到皮下組織，雙側(cè)腎區(qū)筋膜血管比較多，要格外仔細(xì)。 3.取下之后，放入PBS（要求高）或生理鹽水（要求不高）中洗去殘留的血液，然后用手術(shù)刀輕輕刮去皮下脂肪，取得時(shí)候操作好的話，皮下脂肪一般不多。 4.勻漿的時(shí)候，手持式玻璃勻漿器，最簡便最便宜，幾塊錢一個(gè)，但是比較耗費(fèi)人力而且研磨過程會發(fā)熱，可能會對一些不穩(wěn)定成分產(chǎn)生影響。有專門的冷凍研磨勻漿機(jī)，不過要十來萬，看經(jīng)費(fèi)。 5.我現(xiàn)在還是用的手持式玻璃勻漿器，研磨10min，每隔2.5min活動混勻一次。取上層乳白色勻漿液，離心過濾，-20℃保存帶用。根據(jù)用途可能還需要除蛋白除磷脂等前處理操作。。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2017-07-05 17:35:05
回憶之末
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大神留步，最近也在做這個(gè)，但是wb總是做不出來，除了內(nèi)參什么條帶都沒有，請問您有什么心得嗎？有沒有可以參考的Protocol啥的?感謝! 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2018-09-02 16:14:16
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