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gillianwu新蟲 (初入文壇)
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[求助]
三對(duì)引物同時(shí)使用，正向引物之間以及反向引物之間有重疊（不是巢式PCR）,目的何在？
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三對(duì)引物同時(shí)使用，正向引物之間以及反向引物之間有重疊（不是巢式PCR）,目的何在？ 針對(duì)一個(gè)病毒的靶基因的比較保守的區(qū)域，有人針對(duì)該區(qū)域設(shè)計(jì)引物進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR以檢測(cè)該病毒，但是他同時(shí)使用了三對(duì)引物，并且正向引物之間以及反向引物之間均有幾個(gè)堿基重疊（不是巢式PCR）,目的何在？ 對(duì)于上述做法，我的個(gè)人考慮是這樣的，請(qǐng)大家?guī)兔χ刚嚎紤]到雖然是針對(duì)保守區(qū)域擴(kuò)增，但是難免還是會(huì)有個(gè)別堿基突變，所以作者設(shè)計(jì)三對(duì)略有重疊的引物進(jìn)行擴(kuò)增，以增大包含該病毒的樣品的陽(yáng)性檢出率？這樣做以增大陽(yáng)性樣本的檢出率理論上可行嗎？如果理論上可行的話，不知道這種做法是否普遍？謝謝大家。 |
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飛翔的吉大人
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 黏膜免疫學(xué)
2樓2017-03-15 16:47:10
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是重疊延伸PCR，最終的結(jié)果是三對(duì)引物克隆序列以重復(fù)區(qū)為了解點(diǎn)全連在一起，成為一條長(zhǎng)連，實(shí)際就是一次把三個(gè)不同位置的目的片段克隆出來(lái)，一般這三個(gè)應(yīng)該是共同完成一個(gè)任務(wù)的，但是序列不在一起 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-03-16 06:08:37
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