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膜蛋白怎么有活性的表達(dá)？
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| 我最近在做一個膜蛋白的表達(dá)。具有糖基化修飾，356個氨基酸，分子量39KD，已經(jīng)把跨膜區(qū)、信號肽全部刪掉，并進(jìn)行密碼子優(yōu)化，用了大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，載體是PET30a,已經(jīng)嘗試往里面加過2種不同的分子伴侶，絕大部分是不可溶形式存在，形成包涵體，his標(biāo)簽，30、50、75咪唑洗雜蛋白，然后500淋洗，能很明顯的看到還是有很多雜蛋白。試酶活，感覺酶活性不對，不知各位蟲子有什么好的建議？現(xiàn)在再嘗試換標(biāo)簽GST，或者使用酵母表達(dá)系統(tǒng)？因為我所需要的蛋白量相對較大，百毫克級，不知各位蟲子是否有好的建議？@biostar2009@飛約瘋?cè)嗽?/u>@wizardfan@youlinglyw |
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2樓2017-03-15 15:57:37
3樓2017-03-15 20:09:58
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我也是剛學(xué)這方面，剛好看書有你這個問題，糖基化的蛋白是不能用大腸的，如果是人源蛋白，最好用倉鼠卵巢系統(tǒng)，各種修飾都有，實際就是蛋白來源與表達(dá)載體對應(yīng)，還可以用昆蟲系統(tǒng)，最低也要用酵母，但是酵母的修飾和人源的有不同，可能同樣沒活性 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-03-16 06:00:13
5樓2017-03-16 08:19:22
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