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大片段基因連接，轉(zhuǎn)化問題 已有4人參與
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我想把一個6.5kb的片段倒入4.7kb的載體中，insert 是從一個質(zhì)粒上切下來的，保證有相同的酶切位點，連接體系試過1:1，2:1, 3:1，熱激，都不成功，已經(jīng)做了快倆月了，求大神幫忙！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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7樓2017-03-23 09:01:17
borrysa
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8樓2017-03-23 09:08:32
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11樓2017-03-23 10:59:20
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13樓2017-03-23 14:40:16
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我之前連過六千多的片段。我當(dāng)時的載體是八千多，也是連了好久連不上，后來在片段中間找了個酶切位點，切下來。相當(dāng)于三個東西一起連。終于做出來了。按照這個方法。一口氣做出來四個這種克隆。你這個可以把比例換過來試試啊，畢竟你是片段大于載體。還有感受態(tài)的轉(zhuǎn)化效率要高啊。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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試試電轉(zhuǎn)？電轉(zhuǎn)化效率不是一般的高。不成功是板上沒長還是都長空載？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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