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mmqlhy新蟲(chóng) (初入文壇)
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大片段基因連接，轉(zhuǎn)化問(wèn)題 已有4人參與
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我想把一個(gè)6.5kb的片段倒入4.7kb的載體中，insert 是從一個(gè)質(zhì)粒上切下來(lái)的，保證有相同的酶切位點(diǎn)，連接體系試過(guò)1:1，2:1, 3:1，熱激，都不成功，已經(jīng)做了快倆月了，求大神幫忙！ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
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7樓2017-03-23 09:01:17
borrysa
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8樓2017-03-23 09:08:32
kangaroo0513
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11樓2017-03-23 10:59:20
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13樓2017-03-23 14:40:16
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我之前連過(guò)六千多的片段。我當(dāng)時(shí)的載體是八千多，也是連了好久連不上，后來(lái)在片段中間找了個(gè)酶切位點(diǎn)，切下來(lái)。相當(dāng)于三個(gè)東西一起連。終于做出來(lái)了。按照這個(gè)方法。一口氣做出來(lái)四個(gè)這種克隆。你這個(gè)可以把比例換過(guò)來(lái)試試啊，畢竟你是片段大于載體。還有感受態(tài)的轉(zhuǎn)化效率要高啊。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
14樓2017-03-23 15:06:10
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mmqlhy
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試試電轉(zhuǎn)？電轉(zhuǎn)化效率不是一般的高。不成功是板上沒(méi)長(zhǎng)還是都長(zhǎng)空載？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
5樓2017-03-23 01:44:54
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之前試過(guò)電轉(zhuǎn)，做過(guò)陽(yáng)性對(duì)照，轉(zhuǎn)化效率沒(méi)有熱轉(zhuǎn)高，大部分情況是板子上什么也沒(méi)長(zhǎng) 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
6樓2017-03-23 02:42:13
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載體自連還是比較少的，陰性對(duì)照板上只有4個(gè)菌落，我一直以為大片段連接在1:1到3:1，主要我的插入片段比載體大 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
9樓2017-03-23 10:36:12
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