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小菜搞研究新蟲 (初入文壇)
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[求助]
BiFc載體構(gòu)建 已有1人參與
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小新最近在做BiFc載體的構(gòu)建,將目的片段設(shè)計(jì)成含有XbaI和KpnI的片段后,將SpYCEM-150和SpYNE-150各自用雙酶切(時(shí)間試過30分和45分、1h)后,同源重組,(載體和片段的比例試過2:5,4:3),然后正常的轉(zhuǎn)化大腸桿菌(也換過感受態(tài)細(xì)胞),現(xiàn)在有三個(gè)N段的載體構(gòu)好了,N段還有兩個(gè),但最重要的C段的載體怎么弄都沒弄出來,沒弄出來的這幾個(gè)轉(zhuǎn)化時(shí)挑單克隆幾乎沒有、郁悶了,希望各位前輩多多幫忙一下,謝謝謝謝 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
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載體大概10K以上,片段是500-1000,質(zhì)粒雙酶切后用的是切膠回收(師姐強(qiáng)烈囑咐的),我也不知道為什么,今年研一所以特別懵逼 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
木蟲 (正式寫手)
小七

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