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小菜搞研究新蟲 (初入文壇)
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[求助]
BiFc載體構(gòu)建 已有1人參與
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小新最近在做BiFc載體的構(gòu)建，將目的片段設(shè)計(jì)成含有XbaI和KpnI的片段后，將SpYCEM-150和SpYNE-150各自用雙酶切（時(shí)間試過(guò)30分和45分、1h）后，同源重組，（載體和片段的比例試過(guò)2:5，4:3），然后正常的轉(zhuǎn)化大腸桿菌（也換過(guò)感受態(tài)細(xì)胞），現(xiàn)在有三個(gè)N段的載體構(gòu)好了，N段還有兩個(gè)，但最重要的C段的載體怎么弄都沒弄出來(lái)，沒弄出來(lái)的這幾個(gè)轉(zhuǎn)化時(shí)挑單克隆幾乎沒有、郁悶了，希望各位前輩多多幫忙一下，謝謝謝謝 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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小菜搞研究
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4樓2017-04-03 00:20:20
小菜搞研究
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載體大概10K以上，片段是500-1000，質(zhì)粒雙酶切后用的是切膠回收（師姐強(qiáng)烈囑咐的），我也不知道為什么，今年研一所以特別懵逼 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2017-04-02 05:22:36
路人甲007
木蟲 (正式寫手)
小七
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3樓2017-04-02 21:36:04
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5樓2018-08-27 09:39:39
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