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幸福滾滾新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
鎳柱純化洗脫
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樣品在-20℃凍存了三天,之后用含20mM咪唑的平衡液重懸 超聲破碎,工作3秒,間歇7秒。每輪99次,三輪 離心取上清 過(guò)柱: 上樣前,20mM咪唑平衡, 上樣, 上樣后,20mM咪唑平衡液淋洗至基線 各梯度濃度的洗脫液洗脫 問(wèn)題就出現(xiàn)在這,什么也沒(méi)洗脫下來(lái),500mM咪唑洗脫也是什么都沒(méi)有,始終在基線位置,這是發(fā)生了什么? 另外,我用的是GE 1ml預(yù)裝柱,是不是柱子選的太小了? |
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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你可以取樣跑蛋白膠,取超聲后的上清及沉淀和過(guò)柱子后流出液,如果都沒(méi)有說(shuō)明蛋白沒(méi)有表達(dá),只有沉淀里有說(shuō)明蛋白形成包涵體了,上清和流出液里都有說(shuō)明蛋白沒(méi)被掛住。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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