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幸福滾滾新蟲 (初入文壇)
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[求助]
鎳柱純化洗脫
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樣品在-20℃凍存了三天，之后用含20mM咪唑的平衡液重懸 超聲破碎，工作3秒，間歇7秒。每輪99次，三輪 離心取上清 過柱： 上樣前，20mM咪唑平衡， 上樣， 上樣后，20mM咪唑平衡液淋洗至基線 各梯度濃度的洗脫液洗脫 問題就出現(xiàn)在這，什么也沒洗脫下來，500mM咪唑洗脫也是什么都沒有，始終在基線位置，這是發(fā)生了什么？ 另外，我用的是GE 1ml預(yù)裝柱，是不是柱子選的太小了？ |
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星星，你好
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你可以取樣跑蛋白膠，取超聲后的上清及沉淀和過柱子后流出液，如果都沒有說明蛋白沒有表達(dá)，只有沉淀里有說明蛋白形成包涵體了，上清和流出液里都有說明蛋白沒被掛住。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-04-10 22:01:01
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