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我是VV07072新蟲 (初入文壇)
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[求助]
枯草芽孢桿菌芽孢基因Spo0A及上下游序列（3200bp）的測(cè)定問題 已有1人參與
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| 枯草芽孢桿菌是我自己篩選的，沒有做全基因測(cè)序�，F(xiàn)在我要對(duì)這個(gè)菌做芽孢基因的敲除，因此我需要先得到這個(gè)菌的Spo0A及上下游序列（用來構(gòu)建敲除載體），再來設(shè)計(jì)引物。所以，我先參照別人論文中的引物以及PCR條件進(jìn)行，但是一直PCR不出我要的片段。已經(jīng)確定提取出來了總DNA，現(xiàn)在應(yīng)該如何進(jìn)行下去？求幫助！ |
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我是VV07072
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4樓2017-04-22 11:17:16
zhaozhibozhi
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-04-20 07:44:35
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-04-20 07:44:35
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測(cè)個(gè)全基因組吧，便宜實(shí)惠。小片段文庫(kù)+hiseq測(cè)1G數(shù)據(jù)1000元就ok了。當(dāng)然你也可以選擇擴(kuò)側(cè)翼序列，有許多方法，工作量大，花費(fèi)也不低 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-04-20 00:23:58
xuweitao
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
我是VV07072: 金幣+10, ★★★很有幫助 2017-04-22 11:19:54
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
我是VV07072: 金幣+10, ★★★很有幫助 2017-04-22 11:19:54
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附件里是枯草芽孢桿菌168在該基因附近的序列。 因?yàn)槟愕木赡芎退膮^(qū)別較大，你可以根據(jù)該基因內(nèi)部（或上下游基因）的序列保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物（可能需要簡(jiǎn)并引物）來做pcr擴(kuò)增并測(cè)序。 當(dāng)然樓上說的全基因組測(cè)序自然是個(gè)選擇，有這個(gè)預(yù)算的話就做吧，估計(jì)遲早會(huì)在關(guān)于這個(gè)菌的其他性質(zhì)上用到，一勞永逸了。 |
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2017-04-20 16:03:09, 28.71 K
3樓2017-04-20 16:07:14
我是VV07072
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5樓2017-04-22 11:19:21
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