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喜灬歡新蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR 過程中遇到的各種奇怪問題
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問題1：之前設(shè)計(jì)的引物上游是BamH 1 的酶切位點(diǎn)，以基因組DNA為模板能P出來目的片段，然后發(fā)現(xiàn)位點(diǎn)有問題，重新?lián)Q成了Pst1 的位點(diǎn)，引物的退火溫度和GC含量都沒有變，然后就P不出來了，但是把模板換成之前構(gòu)建好的質(zhì)粒就可以P出來 問題2：PCR產(chǎn)物跑出來有1000bp左右，但是切膠回收之后再進(jìn)行鑒定發(fā)現(xiàn)目的片段到4000bp了 問題3：從基因組上P下來的目的片段能夠順利的連接上T載體，但是從構(gòu)件好的質(zhì)粒上P下來額片段就連接不上（做過重復(fù)試驗(yàn)）。 這是最近實(shí)驗(yàn)遇到的一些特別奇怪的問題 ，希望論壇里的大牛能給解答一下 萬(wàn)分感謝！@biostar2009@wizardfan@youlinglyw |
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喜灬歡
新蟲 (初入文壇)
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- 蟲號(hào): 4354999
- 注冊(cè): 2016-01-13
- 專業(yè): 植物生理與生化
2樓2017-05-02 21:52:36
3樓2017-05-09 20:23:18
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