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揚(yáng)花錫白銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
融合PCR測(cè)序突變，但選擇其他兩個(gè)酶無(wú)法成功PCR 已有1人參與
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| 各位朋友，最近在做融合PCR，片段全部都是用TAKARA公司Ex-Taq獲得，但是測(cè)序發(fā)現(xiàn)會(huì)有突變，單個(gè)片段不是很長(zhǎng)，都在1000多bp。但是TAKARA公司的Primestar以及寶賽公司的superpfu均無(wú)法獲得目的片段，求各位出出主意，在此拜謝 |
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gyesang
榮譽(yù)版主 (著名寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
揚(yáng)花錫白: 金幣+1, ★★★★★最佳答案 2017-05-03 23:18:44
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-05-05 16:16:35
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| Ex-Taq不適合擴(kuò)增需要后續(xù)做融合PCR的片段，因?yàn)槠溥�在3‘加A尾巴，導(dǎo)致基因突變。需用高保真酶進(jìn)行PCR，至于高保真PCR酶你可以多試幾個(gè)公司的。如果你是以質(zhì)粒為模板進(jìn)行PPCR，1000bp左右的片段，很容易擴(kuò)增。 |
2樓2017-05-03 21:43:29
揚(yáng)花錫白
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2017-05-03 23:16:28
chenmx1257
新蟲(chóng) (初入文壇)
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這個(gè)如果有設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn)，增加的那個(gè)A可以切掉，不會(huì)影響。主要還是看復(fù)制過(guò)程是否突變。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2017-05-23 22:15:06
chenmx1257
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takara的premix酶單位太少，我們實(shí)驗(yàn)室因此失敗率很高。增加酶量有改善，不過(guò)感覺(jué)被欺騙。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2017-05-23 22:17:03
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