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xingkong544銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
高效液相色譜測(cè)單糖（紫外檢測(cè)器） 已有2人參與
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各位蟲(chóng)友們，本人已被這個(gè)問(wèn)題困擾很久，求助萬(wàn)能的蟲(chóng)友們…我想咨詢(xún)下，Pmp衍生化測(cè)單糖，對(duì)單糖的濃度有什么要求嗎？濃度梯度是怎么確定的��？我用的單糖的濃度梯度是0.2g/L~1g/L共5個(gè)濃度梯度…發(fā)現(xiàn)峰面積并不是成比例的…心累啊…再者，PMp的濃度按文獻(xiàn)稀釋了10倍，峰高還是3000mA左右…會(huì)不會(huì)太高…和衍生物的峰高放在一起，譜圖畫(huà)面有點(diǎn)不和諧��！對(duì)于PMp過(guò)量的問(wèn)題，要達(dá)到多少就可以呢？有什么要求嗎？這個(gè)衍生化反應(yīng)的徹底嗎？查了幾篇文獻(xiàn)，并沒(méi)有看到這方面的說(shuō)法…還請(qǐng)蟲(chóng)友們指教… 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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2樓2017-05-11 10:33:30
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送紅花一朵 |
好的，謝謝您的意見(jiàn)。我按照您的意見(jiàn)再做一次，那我是不是可以把PMp濃度降一點(diǎn)？如果按文獻(xiàn)中的0.5M感覺(jué)是理論量的千倍了快…會(huì)不會(huì)超出檢測(cè)上限… 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
3樓2017-05-11 10:54:53
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4樓2017-05-11 17:09:22
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送紅花一朵 |
您好，我把原溶液按比例稀釋后又做了一遍，發(fā)現(xiàn)所有的單糖幾乎會(huì)在同一個(gè)位置出峰，（因?yàn)殡s峰比較多，只能先單個(gè)單糖跑，確定他的出峰位置，再跑混標(biāo)。我單跑6種單糖的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)每種單糖的出峰時(shí)間非常相似，根本分不開(kāi)，還有就是，一個(gè)特別奇怪的現(xiàn)象，我的單糖事是按比例稀釋的，但是跑出的峰面積線(xiàn)性關(guān)系還是非常差。）而且流動(dòng)相磷酸鹽緩沖液和乙腈的比例也調(diào)了，調(diào)的乙腈體積分?jǐn)?shù)最低為13%，PMp大概10min左右出峰吧，但是它拖尾特別嚴(yán)重，拖了大概10min的樣子，總共跑了40min左右的樣子，一直都沒(méi)有峰出現(xiàn)。我已經(jīng)很小心地在配溶液了。心累…快要崩潰了~我現(xiàn)在陷入了迷茫之中…還請(qǐng)您再指點(diǎn)迷津…萬(wàn)分感謝。。謝謝您！ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
5樓2017-05-17 09:44:31
6樓2017-05-17 10:09:42
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9樓2017-09-12 20:10:07
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【答案】應(yīng)助回帖
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濃度梯度做出來(lái)的峰面積線(xiàn)性較差，說(shuō)明線(xiàn)性范圍的濃度點(diǎn)選擇不合適，即濃度過(guò)高或者過(guò)低，建議從較低濃度（接近定量限）往高濃度進(jìn)樣，再確定合適的線(xiàn)性范圍。對(duì)于衍生，要選擇合適的衍生濃度，太高，會(huì)影響其他目標(biāo)物，太低，衍生不完全，所以建議配置衍生試劑的梯度濃度，確定最佳衍生溶液濃度。對(duì)于單糖分離，如果分不開(kāi)，還是以?xún)?yōu)化方法為主，分離方法優(yōu)化完畢后再進(jìn)行線(xiàn)性范圍、精密度、回收率等方法學(xué)考察。希望對(duì)你有幫助！ |
10樓2017-09-12 22:46:22
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