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土壤微生物數(shù)量測定 已有1人參與
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有沒有土壤微生物數(shù)量（細菌真菌放線菌）的測定方法，國標或者農(nóng)業(yè)標準？謝謝。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2017-06-17 12:53:27
3樓2017-07-21 10:25:54
【答案】應助回帖
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涂布平板法 實驗器材 牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基配制 牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1g 氯化鈉 0.5g 瓊脂 2g 自來水 100mL pH 7.0～7.2 滅菌 1.05kg/cm2，22min 配制具體步驟 1．稱量 按培養(yǎng)基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片。蛋白胨很易吸潮，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，瓶蓋也不要蓋錯。 2．溶化 在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品完全溶解后，補充水分到所需的總體積。如果配制固體培養(yǎng)基，將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最后補足所失的水分。 3．調(diào)pH 在未調(diào)pH前，先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH值，直至pH達7．6。反之，則用1mol/L HCl進行調(diào)節(jié)。注意pH值不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)，否則，將會影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。 對于有些要求pH值較精確的微生物，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計進行（使用方法，可參考有關(guān)說明書）。 4．過濾 趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利結(jié)果的觀察。一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去（本實驗無需過濾）。很多都是不需要過濾的。 5．分裝 按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角燒瓶內(nèi)。分裝裝置見圖Ⅴ-1。 分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。 (1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。 (2)固體分裝分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面，如圖Ⅴ-2。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。 (3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。 6．加塞 培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能（棉塞制作方法附本實驗后面）。 7．包扎 加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。 8．滅菌 將上述培養(yǎng)基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌，則應放入冰箱內(nèi)暫存。 9．擱置斜面 將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。 10．無菌檢查 將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。 四、實驗方法 1．樣品稀釋液的制備 準確稱取待測樣品l0g，放入裝有90ml無菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置搖床上振蕩20min，使微生物細胞分散，靜置20-30s，即成10-1稀釋液；再用1ml無菌吸管，吸取10-1稀釋液lml，移入裝有9ml無菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液；再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml，移入裝有9ml無菌水的試管中，也吹吸三次，即成l0-3稀釋液；以此類推，連續(xù)稀釋，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液。 用稀釋平板計數(shù)時，待測菌稀釋度的選擇應根據(jù)樣品確定。樣品中所含待測菌的數(shù)量多時，稀釋度應高，反之則低。通常測定細菌菌劑含菌數(shù)時，采用10-7、10-8、10-9稀釋度，測定土壤細菌數(shù)量時，采用10-4、10-5、10-6稀釋度，測定放線菌數(shù)量時，采用l0-3、10-4、10-5稀釋度，測定真菌數(shù)量時，采用10-2、10-3、10-4稀釋度。 2．平板接種培養(yǎng) 平板接種培養(yǎng)有混合平板培養(yǎng)法和涂抹平板培養(yǎng)法兩種方法。 （1）混合平板培養(yǎng)法 將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號碼，每一號碼設(shè)置三個重復，用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中，同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中，再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平板中（由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換）。然后在9個平板中分別倒入已融化并冷卻至45—50℃的細菌培養(yǎng)基(圖22-2)，輕輕轉(zhuǎn)動平板，使菌液與培養(yǎng)基混合均勻，冷疑后倒置，適溫培養(yǎng)。至長出菌落后即可計數(shù)。 �。�2）涂抹平板計數(shù)法 涂抹平板計數(shù)法與混合法基本相同，所不同的是先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中，待凝固后編號，然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上（每個編號設(shè)三個重復）。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻（圖22-3），每個稀釋度用一個滅菌刮鏟，更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時，也可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長出菌落后即可計數(shù)。 |
4樓2017-07-21 14:29:43
yeguixiang
新蟲 (著名寫手)
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- 金幣: 701.4
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蔣小光(晉鵬代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖交流~ 2017-07-24 18:47:46
蔣小光(晉鵬代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵回帖交流~ 2017-07-24 18:47:46
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有微生物鑒定系統(tǒng)這臺儀器，可以直接出某種菌數(shù)量等等，具體我不太清楚，只是見過。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2017-07-21 21:46:10
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