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愛總是年輕新蟲 (小有名氣)
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[交流]
接合轉(zhuǎn)移后單交換與雙交換篩選疑問求助 已有1人參與
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在無痕敲除的過程中,將含有重組自殺載體pJQ200SK(Gm)的供體菌大腸桿菌S17-1和受體菌假單胞菌A菌株進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移,對于這部分的實(shí)驗(yàn)我有幾點(diǎn)不明白,還希望懂得以及做過的老師指點(diǎn)一二: 1.S17-1用的LB培養(yǎng)基,受體菌A用的是PM培養(yǎng)基,將兩個(gè)菌分別培養(yǎng)至對數(shù)期之后,按比例進(jìn)行混合,點(diǎn)種于濾膜上,那么濾膜是應(yīng)該貼在那個(gè)培養(yǎng)基上LB還是PM呢? 2.培養(yǎng)一定時(shí)間后,收集濾膜上的菌苔,進(jìn)行第一次篩選,通過抗性篩選,這個(gè)時(shí)候我又應(yīng)該用的是哪個(gè)培養(yǎng)基+抗生素,才能篩選得到單交換子? 3.篩選得到單交換子后,如何通過蔗糖進(jìn)行第二次篩選?具體操作怎么樣進(jìn)行? (備注:受體菌通常是光照厭氧培養(yǎng)) 這些問題已經(jīng)困惑很久,參考很多文獻(xiàn),仍有不懂之處,求指教!感激不盡 ![]() |

新蟲 (小有名氣)
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師兄,你的這些問題解決了嗎,我現(xiàn)在也做這一塊也不算太懂,能不能給我分享一下你的經(jīng)驗(yàn)和PN培養(yǎng)基配方 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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