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愛總是年輕新蟲 (小有名氣)
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[交流]
接合轉移后單交換與雙交換篩選疑問求助 已有1人參與
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在無痕敲除的過程中，將含有重組自殺載體pJQ200SK（Gm）的供體菌大腸桿菌S17-1和受體菌假單胞菌A菌株進行接合轉移，對于這部分的實驗我有幾點不明白，還希望懂得以及做過的老師指點一二： 1.S17-1用的LB培養(yǎng)基，受體菌A用的是PM培養(yǎng)基，將兩個菌分別培養(yǎng)至對數(shù)期之后，按比例進行混合，點種于濾膜上，那么濾膜是應該貼在那個培養(yǎng)基上LB還是PM呢？ 2.培養(yǎng)一定時間后，收集濾膜上的菌苔，進行第一次篩選，通過抗性篩選，這個時候我又應該用的是哪個培養(yǎng)基+抗生素，才能篩選得到單交換子？ 3.篩選得到單交換子后，如何通過蔗糖進行第二次篩選？具體操作怎么樣進行？ （備注：受體菌通常是光照厭氧培養(yǎng)） 這些問題已經困惑很久，參考很多文獻，仍有不懂之處，求指教！感激不盡  |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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師兄，你的這些問題解決了嗎，我現(xiàn)在也做這一塊也不算太懂，能不能給我分享一下你的經驗和PN培養(yǎng)基配方 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2018-05-24 08:10:31
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