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嚇成驢新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
加抗生素的平板，目的基因連接轉(zhuǎn)化，菌長(zhǎng)成一片，求指導(dǎo) 已有3人參與
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目的片段連接的T1載體，轉(zhuǎn)化的dh5α，平板加的卡那抗生素，為什么培養(yǎng)基會(huì)長(zhǎng)成一片？我凃板時(shí)，涂了好久，干了��？有沒(méi)有可能是目的片段插到了卡那抗性的那個(gè)基因位點(diǎn)?請(qǐng)問(wèn)那個(gè)目的基因連接在載體上是隨機(jī)連接上的嗎，還是就是固定連接在lacz那個(gè)位置的？小白研究生，剛剛新建的實(shí)驗(yàn)室，就只有我一個(gè)人，啥都不懂，好慌，求大神詳細(xì)指點(diǎn) IMG_20170616_113803.jpg IMG_20170616_dha5單克隆失敗.jpg |
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2樓2017-06-18 17:12:34
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抗生素問(wèn)題概率大一點(diǎn)，連接產(chǎn)物 也不會(huì)長(zhǎng)這么多 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
5樓2017-06-18 17:29:33
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
嚇成驢: 金幣+5, 好的，我試試amp， 2017-06-21 19:39:29
嚇成驢: 金幣+5, 好的，我試試amp， 2017-06-21 19:39:29
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抗生素問(wèn)題可能性大一些，可能抗生素失效，或者溫度太高，之前有遇到過(guò)培養(yǎng)基溫度低快凝固加抗生素也會(huì)有這種情況。此外，轉(zhuǎn)化后搖菌時(shí)間是否太長(zhǎng)？此外你用的peasy t1？這個(gè)載體有兩種抗性，換amp試試。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
20樓2017-06-21 16:22:30
小松鼠45
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西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-06-19 11:56:41
西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-06-19 11:56:41
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抗生素要配成一千倍母液，-20度保存。用的時(shí)候，等培養(yǎng)基晾到不燙手的時(shí)候加進(jìn)去，搖勻后倒平板。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
8樓2017-06-19 00:14:20
11樓2017-06-19 11:37:48
六維空想
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13樓2017-06-19 15:27:43
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17樓2017-06-21 10:50:41
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