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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » DNA重組 » 求助分子克隆
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[求助]
求助分子克隆 已有1人參與
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最近做分子克隆，pet28a的載體，我用的是nde1和xho1兩個酶切位點，菌液pcr全部是陽性，但雙酶切后就是沒有插入片段，請教，是否要換酶切位點？是不是pet28a載體的xhoI不好用呢 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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fengshen2005
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2017-06-25 09:32:40
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2017-06-25 09:32:40
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菌液PCR假陽性很高（你的片段不管是否連入載體，仍然被你鋪在平板上，你挑點菌斑以外的培養(yǎng)基都能P出你的條帶），能長出斑說明你載體沒切好 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-06-25 05:49:08
傷何處
木蟲 (正式寫手)
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3樓2017-06-25 13:43:12
5樓2017-06-27 16:12:30
xmcw7658樓2017-06-28 16:44:39
4樓2017-06-26 01:06:23
不明非
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6樓2017-06-27 16:17:00
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我是20ul體系切1ng，我也認為是載體沒切開，但我不知道是不是這個載體上酶切位點的問題，因為其他載體我用同樣的體系都沒問題，不知道你有用過28a上同樣的酶切位點嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2017-06-27 23:40:42
9樓2017-06-30 08:07:21
10樓2017-06-30 08:09:14
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