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[求助]
求助分子克隆 已有1人參與
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最近做分子克隆,pet28a的載體,我用的是nde1和xho1兩個(gè)酶切位點(diǎn),菌液pcr全部是陽(yáng)性,但雙酶切后就是沒(méi)有插入片段,請(qǐng)教,是否要換酶切位點(diǎn)?是不是pet28a載體的xhoI不好用呢 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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菌液PCR假陽(yáng)性很高(你的片段不管是否連入載體,仍然被你鋪在平板上,你挑點(diǎn)菌斑以外的培養(yǎng)基都能P出你的條帶),能長(zhǎng)出斑說(shuō)明你載體沒(méi)切好 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

新蟲(chóng) (初入文壇)
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我是20ul體系切1ng,我也認(rèn)為是載體沒(méi)切開(kāi),但我不知道是不是這個(gè)載體上酶切位點(diǎn)的問(wèn)題,因?yàn)槠渌d體我用同樣的體系都沒(méi)問(wèn)題,不知道你有用過(guò)28a上同樣的酶切位點(diǎn)嗎? 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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