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別淚看青城新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求助熒光定量絕對(duì)定量方法 已有1人參與
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有沒(méi)有誰(shuí)做過(guò)熒光定量絕對(duì)定量啊，我們要用DNA作為模板，可以請(qǐng)大神發(fā)一下你們的方案或者相關(guān)文獻(xiàn)嗎，實(shí)驗(yàn)室一小白求助 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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Real-time qPCR定量方法可以分為絕對(duì)定量和相對(duì)定量。 絕對(duì)定量是用一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在相同的條件下目的基因測(cè)得的熒光信號(hào)量同標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，從而得到目的基因的量。該標(biāo)準(zhǔn)品可以是純化的質(zhì)粒DNA，體外轉(zhuǎn)錄的RNA，或者是體外合成的ssDNA。 絕對(duì)定量 從標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得線性方程： Y=-3.432X+34.638;R2= 0.995, E=95%，所以可以進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。 如果未知樣品的 Ct=25， 代入方程： 25=-3.432X+34.638, 所以： X=2.8 Copies=10^2.8 參看文獻(xiàn)Marisa L. Wong and Juan F. Medrano: BioTechniques July 2005。 |
2樓2017-07-05 17:17:06
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