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Stbl3感受態(tài)細胞制備疑惑 已有2人參與
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1. 活化Stbl3（invitrogen）時，用LB平板的話需要加鏈霉素嗎，濃度為多少？因為產(chǎn)品說明書表明其帶鏈霉素抗性； 2. 用什么方法制備要好一些？CaCl2？ 3.平常用的熱激法就可以用于Stbl3的轉(zhuǎn)化了嗎？如果載體帶氨芐抗性，是否平板上要同時帶有氨芐和鏈霉素抗性？ 謝謝大家~~ |
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zhouxfd
木蟲 (正式寫手)
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2樓2017-07-12 01:56:13
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
暮_紫_: 金幣+30, ★★★★★最佳答案 2017-07-14 12:13:23
感謝參與，應助指數(shù) +1
暮_紫_: 金幣+30, ★★★★★最佳答案 2017-07-14 12:13:23
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參照1990年《Gene》上刊登的由Inoue H.等提出的高效感受態(tài)的制備與轉(zhuǎn)化方法。 1、 活化Stbl3（invitrogen）時，什么抗生素都不加。 2、轉(zhuǎn)化時，感受態(tài)細胞膜由于吸附陽離子（Ca2+等）呈液晶狀態(tài)，受到熱激后，細胞膜出現(xiàn)裂隙，外源DNA進入細胞，此時細胞非常脆弱，將其冰浴冷卻，細胞膜修復閉合，進行下一步的復蘇時細胞存活率將提高。 CaCl2轉(zhuǎn)，電轉(zhuǎn)均可。電轉(zhuǎn)比較方便，但是CaCl2轉(zhuǎn)普遍效果較好。 3、熱激法是最好的方法。將該體系轉(zhuǎn)移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結(jié)構(gòu)會發(fā)生劇烈擾動，并隨機出現(xiàn)許多間隙，外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過復制、表達，實現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移，使受體細胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。 最好是同時加 氨芐 和 鏈霉素抗性，降低假陽性。 |
3樓2017-07-12 10:39:03
4樓2017-08-11 10:27:16
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