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皮皮璐新蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR后核酸電泳沒有條帶 已有2人參與
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我是7月12號(hào)提的細(xì)菌基因組，7月14號(hào)跑的PCR ，但是為什么跑不出條帶？之前提的基因組是可以的，所以我想富集一下割膠送去測(cè)序，可是跑了兩次都沒出現(xiàn)條帶，各位大神指點(diǎn)。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-07-15 23:29:46
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西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-07-15 23:29:46
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1、是否已經(jīng)P出來了呢？ 2、如果沒有�？赡苡腥缦略�: 1.模板:含有抑制物，含量低 2.Buffer對(duì)樣品不合適 3.引物設(shè)計(jì)不當(dāng)或者發(fā)生降解 4.反應(yīng)條件：退火溫度太高，延伸時(shí)間太短 對(duì)策: 1.純化模板或者使用試劑盒提取模板DNA或加大模板的用量 2.更換Buffer或調(diào)整濃度 3.重新設(shè)計(jì)引物（避免鏈間二聚體和鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu)）或者換一管新引物 4.降低退火溫度、延長(zhǎng)延伸時(shí)間 |
2樓2017-07-15 15:57:30
皮皮璐
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3樓2017-07-15 16:13:21
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皮皮璐
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6樓2017-07-17 16:21:10
皮皮璐
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7樓2017-07-17 16:21:35
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9樓2017-07-18 14:36:19
10樓2017-07-18 15:22:53
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