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針茅葉片制作石蠟切片 已有2人參與
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石蠟切片的制作過程的步驟包括： 取材，固定，脫水，透明，透蠟，包埋，切片，貼片，染色，透明，封藏等步驟。 具體是： 1．取材 材料的好壞直接影響到切片的質(zhì)量，無論取哪一種動植物材料，以下幾點是必須注意的。 �。�1）植物材料選擇時須盡可能不損傷植物體或所需要的部分；動物材料取用時常對動物施以麻醉，常用的麻醉劑有氯仿和乙醚，或?qū)游餁⑺篮笱杆偃〕鏊枰慕M織。 �。�2）取材必須新鮮，這一點對于從事細(xì)胞生物學(xué)研究尤為重要，應(yīng)該盡可能割取生活著的組織塊，并隨即投入固定液。 �。�3）切取材料時刀要銳利，避免因擠壓細(xì)胞使其受到損傷。 �。�4）切取的材料應(yīng)該小而薄，便于固定劑迅速滲入內(nèi)部。一般厚度不超過2mm，大小不超過5×5mm2。 2．固定 組織和細(xì)胞離開機(jī)體后，在一定時間內(nèi)仍然延續(xù)著生命活動，會引起病理變化直至歸于死亡。為了使標(biāo)本能反映它生前的正常狀態(tài)，必須盡早地用某些化學(xué)藥品迅速地殺死組織和細(xì)胞，阻抑上述變化，并將結(jié)構(gòu)成分轉(zhuǎn)化為不溶性物質(zhì)，防止某些結(jié)構(gòu)的溶化和消失。這種處理就是固定。除了上述作用外，固定劑會使組織適當(dāng)硬化以便于隨后的處理，還會改變細(xì)胞內(nèi)部的折射系數(shù)并使某些部分易于染色。 固定劑的作用對象主要是蛋白質(zhì)，至于其他成分如脂肪和糖，在一般制作時不加考慮，如要觀察這些物質(zhì)，可用特殊的方法將其固定下來。 3．脫水 生物組織中含有大量的水分，它和石蠟是不能相溶的，致使在包埋時石蠟無法滲入組織內(nèi)部，因此須使用脫水劑將水分除盡，這就是脫水的作用。 脫水劑必須能與水以任何比例相混合。脫水劑有兩類：一類是非石蠟溶劑，如乙醇、丙酮等，脫水后必須再經(jīng)過透明，才能透蠟包埋；另一類是兼石蠟溶劑，如正丁醇，脫水后即可直接透蠟。 常用的脫水劑是乙醇，因為它價格便宜，易于得到。 4．透明 組織塊用非石蠟溶劑脫水后必須經(jīng)過透明。透明劑能同時與脫水劑和石蠟混合，它取代了脫水劑后，石蠟便能順利地滲入組織。 透明劑的種類很多，較常用的是二甲苯、甲苯、苯、氯仿、香柏油和苯胺油等。 5．透蠟和包埋 透蠟須在恒溫箱中進(jìn)行，恒溫箱的溫度調(diào)節(jié)至高于石蠟熔點3度，使經(jīng)過透明的組織塊依次用石蠟與二甲苯的等量混合液、純石蠟處理。純石蠟應(yīng)處理2～3次，透蠟的時間依材料性質(zhì)而定，一般每次需15～30min。 透明的關(guān)鍵是控制溫度的恒定，切忌忽高忽低，溫度過低石蠟?zāi)虩o法滲透，溫度過高使組織收縮發(fā)脆。 包埋是使浸透蠟的組織塊包裹在石蠟中。具體做法是；先準(zhǔn)備好紙盒（具體折法見圖1-3及說明），將熔蠟倒入盒內(nèi)，迅速用預(yù)溫的鑷子夾取組織塊平放在紙盒底部，切面朝下，再輕輕提起紙盒，平放在冷水中，待表面石蠟?zāi)毯罅⒓磳⒓埡邪慈胨�，使其迅速冷卻凝固，30min后取出。 包埋用蠟的溫度應(yīng)略高于透蠟溫度，保證組織塊與周圍石蠟完全融為一體。石蠟的迅速冷卻也很重要，否則包埋塊中將會產(chǎn)生結(jié)晶。以后切片時引起碎裂。 6．切片 切片前，將刀口置放大鏡下觀察，選擇刀口平整無缺刻的部分來進(jìn)行切削。將所要切的包埋塊固定在標(biāo)本臺上，使包埋塊外切面與標(biāo)本夾截面平行，并讓包埋塊稍露出一截。將刀臺推至外緣后松開刀片夾的螺旋，上好刀片，使切片刀平面與組織切面間呈15°左右的夾角，包埋塊上下邊與刀口平行。在微動裝置上調(diào)節(jié)切片要求的厚度，調(diào)節(jié)時應(yīng)注意指針不可在兩個刻度之間，否則容易損傷切片機(jī)，將刀臺移至近標(biāo)本臺處，讓刀口與組織切面稍稍接觸，這時就可以開始切片了。方法是：右手轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)輪，左手持毛筆在刀口稍下端接隹切好的片子，并托住切下的蠟帶，待蠟帶形成一定長度后，右手停止轉(zhuǎn)動，持另一枝毛筆輕輕將蠟帶挑起，平放于襯有黑紙的紙盒內(nèi)，注意切片速度不宜太快，搖動轉(zhuǎn)輪用力應(yīng)均勻，防止切片機(jī)震動厲害引起切片厚薄不均勻，還應(yīng)注意轉(zhuǎn)動的方向，以防標(biāo)本臺后移而切不到片子。切片完畢，應(yīng)及時用氯仿將切片機(jī)的有關(guān)部分擦凈。 |
2樓2017-07-19 21:44:40
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鐵蟲 (小有名氣)
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3樓2017-10-18 12:11:26
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