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針茅葉片制作石蠟切片 已有2人參與
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制作的具體過程 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
鐵蟲 (小有名氣)

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石蠟切片的制作過程的步驟包括: 取材,固定,脫水,透明,透蠟,包埋,切片,貼片,染色,透明,封藏等步驟。 具體是: 1.取材 材料的好壞直接影響到切片的質(zhì)量,無論取哪一種動(dòng)植物材料,以下幾點(diǎn)是必須注意的。 。1)植物材料選擇時(shí)須盡可能不損傷植物體或所需要的部分;動(dòng)物材料取用時(shí)常對動(dòng)物施以麻醉,常用的麻醉劑有氯仿和乙醚,或?qū)?dòng)物殺死后迅速取出所需要的組織。 。2)取材必須新鮮,這一點(diǎn)對于從事細(xì)胞生物學(xué)研究尤為重要,應(yīng)該盡可能割取生活著的組織塊,并隨即投入固定液。 。3)切取材料時(shí)刀要銳利,避免因擠壓細(xì)胞使其受到損傷。 (4)切取的材料應(yīng)該小而薄,便于固定劑迅速滲入內(nèi)部。一般厚度不超過2mm,大小不超過5×5mm2。 2.固定 組織和細(xì)胞離開機(jī)體后,在一定時(shí)間內(nèi)仍然延續(xù)著生命活動(dòng),會引起病理變化直至歸于死亡。為了使標(biāo)本能反映它生前的正常狀態(tài),必須盡早地用某些化學(xué)藥品迅速地殺死組織和細(xì)胞,阻抑上述變化,并將結(jié)構(gòu)成分轉(zhuǎn)化為不溶性物質(zhì),防止某些結(jié)構(gòu)的溶化和消失。這種處理就是固定。除了上述作用外,固定劑會使組織適當(dāng)硬化以便于隨后的處理,還會改變細(xì)胞內(nèi)部的折射系數(shù)并使某些部分易于染色。 固定劑的作用對象主要是蛋白質(zhì),至于其他成分如脂肪和糖,在一般制作時(shí)不加考慮,如要觀察這些物質(zhì),可用特殊的方法將其固定下來。 3.脫水 生物組織中含有大量的水分,它和石蠟是不能相溶的,致使在包埋時(shí)石蠟無法滲入組織內(nèi)部,因此須使用脫水劑將水分除盡,這就是脫水的作用。 脫水劑必須能與水以任何比例相混合。脫水劑有兩類:一類是非石蠟溶劑,如乙醇、丙酮等,脫水后必須再經(jīng)過透明,才能透蠟包埋;另一類是兼石蠟溶劑,如正丁醇,脫水后即可直接透蠟。 常用的脫水劑是乙醇,因?yàn)樗鼉r(jià)格便宜,易于得到。 4.透明 組織塊用非石蠟溶劑脫水后必須經(jīng)過透明。透明劑能同時(shí)與脫水劑和石蠟混合,它取代了脫水劑后,石蠟便能順利地滲入組織。 透明劑的種類很多,較常用的是二甲苯、甲苯、苯、氯仿、香柏油和苯胺油等。 5.透蠟和包埋 透蠟須在恒溫箱中進(jìn)行,恒溫箱的溫度調(diào)節(jié)至高于石蠟熔點(diǎn)3度,使經(jīng)過透明的組織塊依次用石蠟與二甲苯的等量混合液、純石蠟處理。純石蠟應(yīng)處理2~3次,透蠟的時(shí)間依材料性質(zhì)而定,一般每次需15~30min。 透明的關(guān)鍵是控制溫度的恒定,切忌忽高忽低,溫度過低石蠟?zāi)虩o法滲透,溫度過高使組織收縮發(fā)脆。 包埋是使浸透蠟的組織塊包裹在石蠟中。具體做法是;先準(zhǔn)備好紙盒(具體折法見圖1-3及說明),將熔蠟倒入盒內(nèi),迅速用預(yù)溫的鑷子夾取組織塊平放在紙盒底部,切面朝下,再輕輕提起紙盒,平放在冷水中,待表面石蠟?zāi)毯罅⒓磳⒓埡邪慈胨校蛊溲杆倮鋮s凝固,30min后取出。 包埋用蠟的溫度應(yīng)略高于透蠟溫度,保證組織塊與周圍石蠟完全融為一體。石蠟的迅速冷卻也很重要,否則包埋塊中將會產(chǎn)生結(jié)晶。以后切片時(shí)引起碎裂。 6.切片 切片前,將刀口置放大鏡下觀察,選擇刀口平整無缺刻的部分來進(jìn)行切削。將所要切的包埋塊固定在標(biāo)本臺上,使包埋塊外切面與標(biāo)本夾截面平行,并讓包埋塊稍露出一截。將刀臺推至外緣后松開刀片夾的螺旋,上好刀片,使切片刀平面與組織切面間呈15°左右的夾角,包埋塊上下邊與刀口平行。在微動(dòng)裝置上調(diào)節(jié)切片要求的厚度,調(diào)節(jié)時(shí)應(yīng)注意指針不可在兩個(gè)刻度之間,否則容易損傷切片機(jī),將刀臺移至近標(biāo)本臺處,讓刀口與組織切面稍稍接觸,這時(shí)就可以開始切片了。方法是:右手轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)輪,左手持毛筆在刀口稍下端接隹切好的片子,并托住切下的蠟帶,待蠟帶形成一定長度后,右手停止轉(zhuǎn)動(dòng),持另一枝毛筆輕輕將蠟帶挑起,平放于襯有黑紙的紙盒內(nèi),注意切片速度不宜太快,搖動(dòng)轉(zhuǎn)輪用力應(yīng)均勻,防止切片機(jī)震動(dòng)厲害引起切片厚薄不均勻,還應(yīng)注意轉(zhuǎn)動(dòng)的方向,以防標(biāo)本臺后移而切不到片子。切片完畢,應(yīng)及時(shí)用氯仿將切片機(jī)的有關(guān)部分擦凈。 |

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