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皮皮彤新蟲 (初入文壇)
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[求助]
嗜酸乳桿菌基因敲除的問題
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我現(xiàn)在將構(gòu)建好的攜帶氯霉素抗性基因的敲除載體PNZ5319-luxS電轉(zhuǎn)化導(dǎo)入噬酸菌后，在含氯霉素抗性的MRS平板中有菌落長(zhǎng)出，就進(jìn)行了提全基因組后PCR驗(yàn)證，p上游同源臂和下游同源臂。 我的問題是??1.現(xiàn)在狀態(tài)的菌長(zhǎng)的很慢，長(zhǎng)3，4天也不會(huì)很濃，所以提出的全基因組條帶也不是很亮? ?2.進(jìn)行PCR，P出了在上下游位置的條帶，但是都不亮，所以無(wú)法送去測(cè)序，而且pcr結(jié)果都很不穩(wěn)定，很多時(shí)候P不出來(lái)。但是因?yàn)橹坝蠵到，感覺這個(gè)基因是已經(jīng)敲掉的，所以我不想放棄，因?yàn)橹半娹D(zhuǎn)化也做了好幾個(gè)月，才有菌長(zhǎng)出來(lái)的。我做這個(gè)實(shí)驗(yàn)還是小白，所以請(qǐng)各位幫幫忙分析一下，不勝感激！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-08-25 11:55:20
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-08-25 11:55:20
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菌長(zhǎng)的不濃就多接幾瓶搖瓶，并考慮降低氯霉素濃度，看看菌會(huì)不會(huì)長(zhǎng)的更好一些。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-08-25 08:36:02
皮皮彤
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3樓2017-08-25 10:24:25
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菌對(duì)氯霉素的耐受性普遍都不是很好，我以前做的大概添加濃度只有1-2.5微克每毫升，建議你做一個(gè)不加氯霉素的當(dāng)對(duì)照，看看是不是氯霉素濃度過(guò)高引起的菌生長(zhǎng)不好。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-08-25 17:25:05
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一般情況添加抗生素主要是為了防止質(zhì)粒丟失，所以理論上對(duì)已經(jīng)有抗性的菌株不加抗生素并不會(huì)影響基因組DNA的提取。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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皮皮彤5樓2017-08-25 17:27:24
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6樓2017-08-25 23:34:38
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是的！這樣是可以的！但是假如確實(shí)是加了抗生素引起的生長(zhǎng)不好，你需要做抗生素馴化實(shí)驗(yàn)。可能需要多做幾輪，后面就會(huì)長(zhǎng)的很好了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2017-09-05 07:06:46
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