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碇元渡至尊木蟲 (著名寫手)
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[求助]
求助RT-PCR引物驗(yàn)證的方法 已有1人參與
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| 本人要做干細(xì)胞成脂分化的實(shí)驗(yàn)，,相通過RT-PCR的方法檢測(cè)分化后的細(xì)胞中目的基因的表達(dá)量。訂購(gòu)了RT-PCR要用的內(nèi)參引物和目的基因引物，但剛剛接觸RT-PCR，不知道怎么驗(yàn)證內(nèi)參引物好用不好用，需要看哪些參數(shù)，比如熔解曲線之類。煩請(qǐng)大家提供一下粗略的方案、方法。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
碇元渡: 金幣+100, ★★★★★最佳答案, 謝謝 2017-10-03 09:41:17
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
碇元渡: 金幣+100, ★★★★★最佳答案, 謝謝 2017-10-03 09:41:17
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驗(yàn)證RT-PCR體系（引物）好壞，一般通過標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證： 1.RT-PCR曲線應(yīng)順滑，拐點(diǎn)清楚，基線期，指數(shù)期，平臺(tái)期三期明顯； 2.擴(kuò)增效率應(yīng)在90%-110%之間； 3.如果是染料法，溶解曲線僅有一個(gè)主峰；’ 4.NTC不加模板的對(duì)照應(yīng)無擴(kuò)增曲線，或者擴(kuò)增曲線起峰時(shí)間大于35個(gè)循環(huán)； 如有其它問題，歡迎及時(shí)溝通，祝實(shí)驗(yàn)順利！ |
2樓2017-09-30 14:07:06
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