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碇元渡至尊木蟲 (著名寫手)
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[求助]
求助RT-PCR引物驗證的方法 已有1人參與
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| 本人要做干細胞成脂分化的實驗，,相通過RT-PCR的方法檢測分化后的細胞中目的基因的表達量。訂購了RT-PCR要用的內參引物和目的基因引物，但剛剛接觸RT-PCR，不知道怎么驗證內參引物好用不好用，需要看哪些參數(shù)，比如熔解曲線之類。煩請大家提供一下粗略的方案、方法。 |
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
碇元渡: 金幣+100, ★★★★★最佳答案, 謝謝 2017-10-03 09:41:17
感謝參與，應助指數(shù) +1
碇元渡: 金幣+100, ★★★★★最佳答案, 謝謝 2017-10-03 09:41:17
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驗證RT-PCR體系（引物）好壞，一般通過標準曲線驗證： 1.RT-PCR曲線應順滑，拐點清楚，基線期，指數(shù)期，平臺期三期明顯； 2.擴增效率應在90%-110%之間； 3.如果是染料法，溶解曲線僅有一個主峰；’ 4.NTC不加模板的對照應無擴增曲線，或者擴增曲線起峰時間大于35個循環(huán)； 如有其它問題，歡迎及時溝通，祝實驗順利！ |
2樓2017-09-30 14:07:06
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