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依米花櫻花新蟲 (初入文壇)
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[求助]
擴5kb的目的片段沒出帶 已有1人參與
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擴5000bp的目的條帶，用的Pfu酶，電泳圖顯示沒有條帶，只有引物二聚體，哪位大神知道是怎么回事吖 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2017-10-02 23:26:42
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西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2017-10-02 23:26:42
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1、5kb直接連接就好了，跟普通的一樣。如果擔心效率延長時間，調(diào)節(jié)好比例。 2、正常擴，延伸時間加長，多加點聚合酶，加上正負對照。如果還是擴不出來，檢查模板，是不是降解了之類等等。 3、正常以質(zhì)粒為模板的PCR是比較容易的，你先確定下質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度，摸摸PCR的反應條件，可以試試寶生物的LATaq(長片段擴增酶)正常5K的話引物設計很關(guān)鍵，你可以考慮重新設計引物。 |
5樓2017-10-02 19:29:44
2樓2017-10-02 16:44:08
3樓2017-10-02 17:06:16
依米花櫻花
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4樓2017-10-02 17:17:32
czz19901230
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6樓2017-10-02 19:33:33
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2017-10-05 08:00:24
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2017-10-05 08:00:24
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查一查你的5kb鏈的特征，試一試2步法！（但前提是1.常規(guī)的方法真的做不出來；2.引物能用，等等�。� 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2017-10-03 20:47:42
10樓2017-10-04 22:22:34
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