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依米花櫻花新蟲 (初入文壇)
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[求助]
擴(kuò)5kb的目的片段沒出帶 已有1人參與
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擴(kuò)5000bp的目的條帶，用的Pfu酶，電泳圖顯示沒有條帶，只有引物二聚體，哪位大神知道是怎么回事吖 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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3樓2017-10-02 17:06:16
2樓2017-10-02 16:44:08
依米花櫻花
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 204.8
- 散金: 10
- 帖子: 39
- 在線: 11.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 5594312
- 注冊(cè): 2017-02-16
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
4樓2017-10-02 17:17:32
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-10-02 23:26:42
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-10-02 23:26:42
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1、5kb直接連接就好了，跟普通的一樣。如果擔(dān)心效率延長時(shí)間，調(diào)節(jié)好比例。 2、正常擴(kuò)，延伸時(shí)間加長，多加點(diǎn)聚合酶，加上正負(fù)對(duì)照。如果還是擴(kuò)不出來，檢查模板，是不是降解了之類等等。 3、正常以質(zhì)粒為模板的PCR是比較容易的，你先確定下質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度，摸摸PCR的反應(yīng)條件，可以試試寶生物的LATaq(長片段擴(kuò)增酶)正常5K的話引物設(shè)計(jì)很關(guān)鍵，你可以考慮重新設(shè)計(jì)引物。 |
5樓2017-10-02 19:29:44
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