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有關(guān)酵母單雜交驗證試驗操作相關(guān)問題！ 已有2人參與
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之前大半年都在單雜篩庫，現(xiàn)在得到了幾個基因，然后克隆出來做點對點的驗證。 有幾點問題，將基因AD載體和誘餌載體共轉(zhuǎn)之后是涂在SD/-Leu還是SD/-Ura-Leu平板上呢？個人感覺都差不多，平板上是否要加AbA？ 以及后面的挑選陽性克隆是用兩對引物檢測嗎？（啟動子和基因） 點斑的時候我看到有的是①用YPDA搖菌，OD有要求嗎？然后稀釋10、100、1000、10000倍進行點斑，用YPDA稀釋還是ddH2O？ 這種稀釋點斑的意義是啥？ ②有的點斑是直接挑陽性克隆用0.9%NaCl調(diào)制OD=0.2 然后點斑 不知道哪一種比較靠譜或者有各自的優(yōu)勢？ PS最后問一下這種篩庫出來的陽性率怎么樣？有點擔心假陽性的  畢竟課題就是做這個的，好不容易有點結(jié)果。 |
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3樓2018-07-17 08:37:44
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