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有關(guān)酵母單雜交驗(yàn)證試驗(yàn)操作相關(guān)問題！ 已有2人參與
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之前大半年都在單雜篩庫，現(xiàn)在得到了幾個(gè)基因，然后克隆出來做點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的驗(yàn)證。 有幾點(diǎn)問題，將基因AD載體和誘餌載體共轉(zhuǎn)之后是涂在SD/-Leu還是SD/-Ura-Leu平板上呢？個(gè)人感覺都差不多，平板上是否要加AbA？ 以及后面的挑選陽性克隆是用兩對(duì)引物檢測(cè)嗎？（啟動(dòng)子和基因） 點(diǎn)斑的時(shí)候我看到有的是①用YPDA搖菌，OD有要求嗎？然后稀釋10、100、1000、10000倍進(jìn)行點(diǎn)斑，用YPDA稀釋還是ddH2O？ 這種稀釋點(diǎn)斑的意義是啥？ ②有的點(diǎn)斑是直接挑陽性克隆用0.9%NaCl調(diào)制OD=0.2 然后點(diǎn)斑 不知道哪一種比較靠譜或者有各自的優(yōu)勢(shì)？ PS最后問一下這種篩庫出來的陽性率怎么樣？有點(diǎn)擔(dān)心假陽性的  畢竟課題就是做這個(gè)的，好不容易有點(diǎn)結(jié)果。 |
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2樓2018-01-24 12:29:13
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3樓2018-07-17 08:37:44
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