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凱倫愛佳佳金蟲 (正式寫手)
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[交流]
擴(kuò)擴(kuò)擴(kuò)，擴(kuò)不出來(lái)?xiàng)l帶�。�！ 已有2人參與
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最近用cDNA在擴(kuò)兩個(gè)3k的條帶，怎么擴(kuò)都擴(kuò)不出來(lái)，我真是快醉了！�。≡O(shè)計(jì)了好幾個(gè)引物了都，唉。。。一個(gè)月了�。�！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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諸葛小汐
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-12-15 09:23:04
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有的長(zhǎng)的cDNA擴(kuò)增是有難度 你首先用RT-PCR檢測(cè)下 你要的cDNA有沒有 然后設(shè)計(jì)overhang的引物分段PCR 然后用fusion的方法用 載體連起來(lái) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-12-14 23:59:08
凱倫愛佳佳
金蟲 (正式寫手)
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你的意思是先把我的cDNA跑個(gè)膠看看，有沒有長(zhǎng)的片段么？ 不行就分段擴(kuò)增，再用overlap連接起來(lái)可以么？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2017-12-15 00:54:20
二馬人土土
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先用actin檢測(cè)cDNA，保證其質(zhì)量沒問題。選擇的引物是否有接頭？如果有可以先去掉接頭擴(kuò)增；可以選擇做剃度退火，設(shè)置55到65的退貨溫度嘗試；可以做touchdown pcr，活著熱啟動(dòng) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-12-15 20:01:46
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