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凱倫愛佳佳金蟲 (正式寫手)
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[交流]
擴(kuò)擴(kuò)擴(kuò)，擴(kuò)不出來?xiàng)l帶�。�！ 已有2人參與
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最近用cDNA在擴(kuò)兩個(gè)3k的條帶，怎么擴(kuò)都擴(kuò)不出來，我真是快醉了�。�！設(shè)計(jì)了好幾個(gè)引物了都，唉。。。一個(gè)月了！�。� 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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諸葛小汐
鐵桿木蟲 (小有名氣)
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2017-12-15 09:23:04
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有的長的cDNA擴(kuò)增是有難度 你首先用RT-PCR檢測下 你要的cDNA有沒有 然后設(shè)計(jì)overhang的引物分段PCR 然后用fusion的方法用 載體連起來 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-12-14 23:59:08
凱倫愛佳佳
金蟲 (正式寫手)
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3樓2017-12-15 00:54:20
二馬人土土
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先用actin檢測cDNA，保證其質(zhì)量沒問題。選擇的引物是否有接頭？如果有可以先去掉接頭擴(kuò)增；可以選擇做剃度退火，設(shè)置55到65的退貨溫度嘗試；可以做touchdown pcr，活著熱啟動(dòng) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2017-12-15 20:01:46
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