 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2064 | 回復: 5 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗滌。 已有4人參與
|
|||
|
優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結合事件被保留，在最后一步產生信號。而不充分的洗滌會導致差異和高背景，從而帶來不理想的結果。本文將為你介紹一些利用自動洗板機來洗滌ELISA平板的技巧。 Tips： 免疫分析，比如ELISA，一般包含兩個或以上的孵育步驟，中間以洗滌隔開。ELISA通常在96孔板中開展，其上包被了結合抗原或抗體。在封閉步驟后，包被后的平板首先與一抗或抗原孵育。隨后通過一些洗滌步驟去除未結合（低親和力）的抗原-抗體復合物。接著，平板與二抗孵育。這種帶有酶的抗體與高親和力的抗原-抗體復合物結合。之后，又是一輪洗滌。最后是添加底物并檢測信號。 我們可使用多種底物來檢測最終的抗原-抗體復合物。底物分為三類：自然發(fā)光、化學發(fā)光和熒光。準確說來，ELISA這個詞指的是使用自然發(fā)光底物的分析。而使用化學發(fā)光底物的分析被稱為Luminescent Immunoassay（LIA），使用熒光二抗的分析被稱為Fluorescent Immunoassay（FIA）。 1洗滌參數： 第一個主要的參數是洗滌量。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應孔的洗滌量必須相同。 ELISA板的制造商通常會在試劑盒的使用手冊中列出包被量。行業(yè)中通常使用的包被量是200μl。如果你的試劑盒也是這樣，那么制造商可能會建議使用300μl洗滌液進行洗滌，以便清潔整個反應孔的壁。一般來說，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。 2洗滌次數： 第二個影響洗滌效果的主要參數是洗滌循環(huán)的量。當然，洗滌次數越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會降低信號強度，使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復洗滌三次。不過，ELISA板的制造商會對洗滌次數提出建議。一般而言，制造商包被平板需要的洗滌次數比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數。 控制洗滌量和洗滌次數的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說，96孔板的每個孔能容納330至460 μl。不過，有些自動化洗板機可設置程序，分配遠遠超出這個量的洗滌液，比如1 ml。它是如何做到的呢？其實很簡單，就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術能增加洗滌量，但不會溢出到其他孔中。 3抽吸： 另外，還有一些參數會影響洗滌步驟的效果。這些參數包括吸液高度和吸入位置，這兩者都能調整，以降低背景（殘留量）和差異。 殘留液體中包含未結合的抗原或抗體，它們會增加背景信號。殘留量越小，殘留液體越少，轉移到下一步的干擾液體也就越少。 吸液高度會明顯影響殘留量；如果洗滌吸頭與反應孔底部的距離稍大，那就會讓殘留量急劇增加。反之，如果洗滌吸頭壓著反應孔底部，那么也會使吸液效率降低，殘留量增加。 目前的洗板機一般使用兩種類型的洗頭：剛性和浮動。浮動洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動，而剛性洗頭則固定在適當的位置。使用剛性洗頭的洗滌操作在優(yōu)化起來更為復雜，因為你需要非常仔細地調整吸液高度。如果你們實驗室使用幾種不同的板，那可能會很耗時。在使用浮動洗頭時，吸頭會降到反應孔的底部。調整高度就不是很重要，因此洗頭會下降到底部。 抽吸的位置也對殘留量有著重要影響；如果每個孔只使用一個抽吸點（這很常見，因為更快），那么抽吸的位置需要優(yōu)化。最佳的位置取決于洗頭的性狀，但它幾乎不在反應孔的中間，即使這是所有洗頭最常見的默認位置。一般來說，最佳位置在孔中間與孔壁之間的某處。 反應孔的形狀也會影響殘留量。C形底（平底圓角）的微孔板一般會比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。 如果沒有自動洗板機，采用手工洗滌，那么也需要注意幾點。使用8道或12道微量移液器，采用倒吸的方法進行洗滌；不同廠家的洗液不宜相互混用。洗板時需保證微孔板平放，將洗滌液注滿各孔，但盡量避免漏液溢液，以每孔300 μl為宜；板洗次數一般為3次，要保證洗板的浸泡時間，每次浸泡時間一般為30-60 秒；盡量減少洗液殘留量，推薦每次洗板后進行拍板，并及時更換吸水紙，避免吸水紙的碎屑粘到反應孔內。 ELISA看起來很簡單，但是在實際操作過程中，也不能掉以輕心，還是應該仔細檢查洗滌步驟，才能獲得準確的結果。 |
回復此樓» 猜你喜歡
0703化學調劑
已經有12人回復
-
0703化學 305求調劑
已經有4人回復
-
0703化學調劑，求各位老師收留
已經有10人回復
-
271材料工程求調劑
已經有5人回復
-
281求調劑（0805）
已經有16人回復
-
304求調劑
已經有6人回復
-
材料工程專碩調劑
已經有6人回復
-
一志愿天大材料與化工（085600）總分338
已經有4人回復
-
085700資源與環(huán)境308求調劑
已經有3人回復
-
求材料調劑
已經有8人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
3樓2018-04-12 18:19:19
AmyMeng同學
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 168.6
- 帖子: 17
- 在線: 7.1小時
- 蟲號: 8464265
- 注冊: 2018-04-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 細胞信號轉導
2樓2018-04-10 07:41:13
落雨sjh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
沈益鋒
- 應助: 61 (初中生)
- 金幣: 5075.8
- 散金: 1599
- 紅花: 12
- 帖子: 4628
- 在線: 576.6小時
- 蟲號: 2252432
- 注冊: 2013-01-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 高分子合成化學
4樓2018-06-02 10:36:37
大良dl
鐵蟲 (正式寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6209.5
- 帖子: 851
- 在線: 18.3小時
- 蟲號: 5822215
- 注冊: 2017-03-03
- 專業(yè): 生物醫(yī)用高分子材料
5樓2018-12-20 11:00:16
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學調劑 +8 | 妮妮ninicgb 2026-03-15 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 354求調劑 +4 | Tyoumou 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料305分求調劑 +5 | 想上岸的鯉魚 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化學工程321分求調劑 +15 | 大米飯！ 2026-03-15 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 304求調劑 +12 | 小熊joy 2026-03-14 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 278求調劑 +5 | 煙火先于春 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 301求調劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 有沒有道鐵/土木的想調劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專碩調劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學，080500材料科學與工程，調劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 機械專碩325，尋找調劑院校 +3 | y9999 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 289求調劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-14 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308 085701 四六級已過求調劑 +7 | 溫喬喬喬喬 2026-03-12 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 招收0805（材料）調劑 +3 | 18595523086 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工301求調劑 +5 | 奕束光 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調劑 +8 | 困于星晨 2026-03-12 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 295求調劑 +3 | 小匕仔汁 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 290求調劑 +7 | ADT 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學碩求調劑 +3 | 崔wj 2026-03-12 | 4/200 |
|