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eloi2017新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
點(diǎn)突變半年了還沒(méi)出來(lái)。。求助。。 已有4人參與
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要突變啟動(dòng)子上一個(gè)位點(diǎn)，試了酶切連接，NEB的HiFi Assembly，定點(diǎn)突變，用過(guò)TOP10F'和NEB 10ß做轉(zhuǎn)化，每次不是不長(zhǎng)就是WT。。 比如這次，倆片斷PCR完了跑膠看沒(méi)問(wèn)題，倆片斷和質(zhì)粒酶切完膠回收也都o(jì)k，然后連接完長(zhǎng)出來(lái)還是WT。。想不明白這WT是哪兒來(lái)的，按說(shuō)體系里應(yīng)該沒(méi)有了啊。。 求各位大神指點(diǎn)迷津。。 |
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15樓2018-01-30 22:16:10
awaken2013
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
drwhoknowss: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2018-01-31 11:48:36
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
drwhoknowss: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2018-01-31 11:48:36
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特異性不知道 降低循環(huán)數(shù)少于10 調(diào)整退火溫度 dpn1 處理2小時(shí) 過(guò)夜連接 突變我都不知道做了幾百個(gè) 關(guān)鍵摸準(zhǔn)退火溫度 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
12樓2018-01-30 21:16:54
eloi2017
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19樓2018-01-31 16:20:09
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5樓2018-01-30 18:56:19
8樓2018-01-30 20:09:28
awaken2013
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9樓2018-01-30 20:27:51
eloi2017
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14樓2018-01-30 22:10:15
。嘿嘿。我也不懂2樓2018-01-30 17:16:14
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10樓2018-01-30 20:59:55
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