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wyg109銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】透析袋使用
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突然要使用透析袋，之前沒用過，不知道怎么樣的，是不是用之前要處理阿，還要帶手套，有懂的嗎？麻煩給我說說原理和使用方法。我需要準(zhǔn)備什么？ [ Last edited by zhangwj on 2009-3-25 at 00:11 ] |
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2樓2009-03-25 00:10:53
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yusen_1982(金幣+2,VIP+0):歡迎應(yīng)助！ 3-25 10:59
yusen_1982(金幣+2,VIP+0):歡迎應(yīng)助！ 3-25 10:59
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網(wǎng)上查到的一些資料，我身邊有人在做透析液的檢測的，最好帶手套，畢竟是做試驗的基本要求吧~ 透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，就叫做透析袋。 自Thomas Graham 1861年發(fā)明透析方法至今已有一百多年。透析已成為生物化學(xué)實驗室最簡便最常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過程中，除鹽、除少量有機溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。 透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi)，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi)，而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴散透析到袋外，直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”，袋（膜）外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。 透析的動力是擴散壓，擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度，還正比于膜的面積和溫度，通常是4℃透析，升高溫度可加快透析速度。 透析膜可用動物膜和玻璃紙等，但用的最多的還是用纖維素制成的透析膜，目前常用的是美國Union Carbide （聯(lián)合碳化物公司）和美國光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的各種尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的最小分子量，縮寫為MwCO）通常為1萬左右。 商品透析袋制成管狀，其扁平寬度為23 mm～50 mm不等。為防干裂，出廠時都用10％的甘油處理過，并含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì)，它們對蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害，用前必須除去�？上扔�50％乙醇煮沸1小時，再依次用50％乙醇、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌，最后用蒸餾水沖洗即可使用。實驗證明，50％乙醇處理對除去具有紫外吸收的雜質(zhì)特別有效。使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中，若長時間不用，可加少量NaN2，以防長菌。洗凈涼干的透析袋彎折時易裂口，用時必須仔細(xì)檢查，不漏時方可重復(fù)使用。 新透析袋如不作如上的特殊處理，則可用沸水煮五至十分鐘，再用蒸餾水洗凈，即可使用。使用時，一端用橡皮筋或線繩扎緊，也可以使用特制的透析袋夾夾緊，由另一端灌滿水，用手指稍加壓，檢查不漏，方可裝入待透析液，通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，透析的小分子量較大時，袋外的水和緩沖液過量進入袋內(nèi)將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析過夜時，體積增加50％是正常的。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些，可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析，可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。 檢查透析效果的方法是：用1％ BaCl2檢查(NH4)2SO4，用1％ AgNO3 檢查NaCl、KCl等。 為了提高透析效率，還可以使用各種透析裝置。使用者也可以自行設(shè)計與制作各種簡易的透析裝置。美國生物醫(yī)學(xué)公司（Biomed Instruments Inc.）生產(chǎn)的各種型號的Zeineh 透析器，由于使用對流透析的原理，使透析速度和效率大大提高。 |
3樓2009-03-25 10:54:13
winter_gates
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zhangwj(金幣+2,VIP+0):謝謝！ 3-25 20:24
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樓上哪講的是怎么處理，我記得我回答過好幾次這個問題了。 使用前處理： 1. 把透析袋剪成適當(dāng)長度（10-20cm）的小段。 2. 在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將透析袋煮沸10分鐘。 3. 用蒸餾水徹底清洗透析袋。 4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鐘。 5. 冷卻后，存放于4度，必須確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi)。從此時起取用透析袋是必須戴手套。 6. 用前在透析袋內(nèi)裝滿水然后排出，將之清洗干凈。 |
4樓2009-03-25 20:20:46
wuwt
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5樓2009-03-26 02:09:24
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6樓2009-03-26 09:49:06
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7樓2009-03-27 23:35:32
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怎么老有人問透析袋的問題？建議樓主發(fā)關(guān)于透析袋的帖子，最好先搜索下，我最近已經(jīng)回答透析袋問題兩次了。樓主可參考以下兩個帖子 http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=1239866 http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=1201511 |
8樓2009-03-28 13:48:11
yzhuang
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１，依材料而定，大略而言，常用透析袋材料可分為Cellulose Ester (CE), Regenerated Cellulose (RC) and Polyvinylidene Difluoride (PVDF)。不同材料相對要求不一致，詳見產(chǎn)品說明，不細(xì)述�？偟膩碚f，如果你認(rèn)為透析袋材料中殘留的甘油以及痕量重金屬和硫化物雜質(zhì)不影響你的分離成分的活性或穩(wěn)定的話，那就用蒸餾水泡泡就行了。 ２，帶手套的目的有二個，一是個人防護，二是防止手上污染透析袋，以及防止指甲不小心刮劃。 |
9樓2009-03-29 11:28:56
zouqin8091
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透析袋
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透析是利用半透膜的選擇性在溶液里分離大分子和小分子的一種分離技術(shù)，常常用于除去蛋白或核酸樣品中的鹽、變性劑、還原劑之類的小分子雜質(zhì)，有時也用于置換樣品緩沖液。樣品在膜的一邊，緩沖液在另一邊，小分子即向兩邊擴散直到平衡透析是利用半透膜的選擇性在溶液里分離大分子和小分子的一種分離技術(shù)，常常用于除去蛋白或核酸樣品中的鹽、變性劑、還原劑之類的小分子雜質(zhì)，有時也用于置換樣品緩沖液。樣品在膜的一邊，緩沖液在另一邊，小分子即向兩邊擴散直到平衡,而大分子則由于半透膜的阻攔而留在一端，通過不斷更換緩沖液，即可將樣品中要除掉的小分子稀釋到足夠低的濃度。該技術(shù)自五十年代發(fā)展流行起來，主要使用半透膜制成的透析袋作為工具，一直存在透析時間長、樣品回收率不高、無法處理微量樣品的難題。 透析袋的處理 分子在半透膜間的分離是由膜兩側(cè)溶液的濃度差驅(qū)動的，受相對于膜內(nèi)微孔尺寸的分子大小(分子質(zhì)量)的限制。微孔尺寸決定著截留分子質(zhì)量，截留分子質(zhì)量的定義是當(dāng)90%的溶質(zhì)分子可被膜截留時的分子質(zhì)量。實際某一溶質(zhì)的通透性不僅取決于分子的大小，還取決于分子的形狀、分子的水化程度及其所帶的電荷。這些參數(shù)均受溶劑的性質(zhì)、pH以及離子強度的影響。因此截留分子質(zhì)量只能作為參考，而不能絕對地用來預(yù)測在各種溶質(zhì)和溶劑下的透析行為。市售的透析膜孔徑范圍很大(從100Da到2 000kDa)。在透析大多數(shù)質(zhì)粒DNA和許多蛋白質(zhì)時，截留分子質(zhì)量在12000～14000Da之間比較適合。 (1)將透析管剪成適當(dāng)長度(10～20cm)的小段，即形成透析袋。 (2)在大體積的2%(m/v)碳酸氫鈉和1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將透析袋煮沸10 min。 (3)將透析袋用蒸餾水徹底漂洗。 (4)將透析袋置1 mmol/L EDTA(pH 8.0)中煮沸10min。 (5)待透析袋冷卻，存放于4℃，應(yīng)確保透析袋始終浸沒在液體中。 重要：從此步起用透析袋時一定要戴手套操作。 (6)在使用之前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗。 [注]也可將透析袋放在廣口瓶中充滿水，松動瓶蓋，于20psi(1.40 kg/cm2)高壓滅菌10min代替第4步用1 mmol/L EDTA(pH8.0)煮沸10min的操作。 使用完后將透析袋浸泡在70％乙醇中以免長菌。 |
10樓2009-04-02 09:40:35
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