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wyg109銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】透析袋使用
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突然要使用透析袋,之前沒用過,不知道怎么樣的,是不是用之前要處理阿,還要帶手套,有懂的嗎?麻煩給我說說原理和使用方法。我需要準(zhǔn)備什么? [ Last edited by zhangwj on 2009-3-25 at 00:11 ] |
藥物控釋 | 高分子聚合方面 |
金蟲 (小有名氣)
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網(wǎng)上查到的一些資料,我身邊有人在做透析液的檢測的,最好帶手套,畢竟是做試驗(yàn)的基本要求吧~ 透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,就叫做透析袋。 自Thomas Graham 1861年發(fā)明透析方法至今已有一百多年。透析已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室最簡便最常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過程中,除鹽、除少量有機(jī)溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。 透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi),而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外,直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。 透析的動力是擴(kuò)散壓,擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。 透析膜可用動物膜和玻璃紙等,但用的最多的還是用纖維素制成的透析膜,目前常用的是美國Union Carbide (聯(lián)合碳化物公司)和美國光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的各種尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的最小分子量,縮寫為MwCO)通常為1萬左右。 商品透析袋制成管狀,其扁平寬度為23 mm~50 mm不等。為防干裂,出廠時都用10%的甘油處理過,并含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì),它們對蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害,用前必須除去。可先用50%乙醇煮沸1小時,再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌,最后用蒸餾水沖洗即可使用。實(shí)驗(yàn)證明,50%乙醇處理對除去具有紫外吸收的雜質(zhì)特別有效。使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中,若長時間不用,可加少量NaN2,以防長菌。洗凈涼干的透析袋彎折時易裂口,用時必須仔細(xì)檢查,不漏時方可重復(fù)使用。 新透析袋如不作如上的特殊處理,則可用沸水煮五至十分鐘,再用蒸餾水洗凈,即可使用。使用時,一端用橡皮筋或線繩扎緊,也可以使用特制的透析袋夾夾緊,由另一端灌滿水,用手指稍加壓,檢查不漏,方可裝入待透析液,通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,透析的小分子量較大時,袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析過夜時,體積增加50%是正常的。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析,可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。 檢查透析效果的方法是:用1% BaCl2檢查(NH4)2SO4,用1% AgNO3 檢查NaCl、KCl等。 為了提高透析效率,還可以使用各種透析裝置。使用者也可以自行設(shè)計(jì)與制作各種簡易的透析裝置。美國生物醫(yī)學(xué)公司(Biomed Instruments Inc.)生產(chǎn)的各種型號的Zeineh 透析器,由于使用對流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。 |
至尊木蟲 (知名作家)
金蟲 (正式寫手)
生命過客
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樓上哪講的是怎么處理,我記得我回答過好幾次這個問題了。 使用前處理: 1. 把透析袋剪成適當(dāng)長度(10-20cm)的小段。 2. 在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將透析袋煮沸10分鐘。 3. 用蒸餾水徹底清洗透析袋。 4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鐘。 5. 冷卻后,存放于4度,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi)。從此時起取用透析袋是必須戴手套。 6. 用前在透析袋內(nèi)裝滿水然后排出,將之清洗干凈。 |

木蟲 (正式寫手)
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