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蛐蛐兒兒新蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白測不到活性，求解答 已有2人參與
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本人用鎳柱純化蛋白后，跑SDS發(fā)現(xiàn)咪唑濃度為20mM時條帶最亮最寬，收集20mM咪唑的洗脫液之后，超濾濃縮（除咪唑了）之后發(fā)現(xiàn)測不到酶活。 細胞發(fā)酵液，細胞發(fā)酵液破碎后的液體，收集細胞重懸并破碎的液體，破碎液離心取的上清，以及經(jīng)過鎳柱第一次收集的液體均可以測到酶活且都較高. 0mM的咪唑也可以測到活性但相對較低，5.10.20...mM(除去咪唑和不除去均測不到)的洗脫液均測不到活性 未加IPTG誘導(dǎo)的工程菌測不到酶活 有大神可以為我解釋一下嗎？本人研二，這個問題解決不了怕真的要延期了 T.T |
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9樓2018-08-30 19:58:57
yubeihong
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2018-08-31 08:21:25
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2018-08-31 08:21:25
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20mM洗脫比較奇怪，一般這個濃度洗雜。100-300mM洗脫。我們用purimag的Ni磁珠是這樣的。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2018-07-03 21:25:41
蛐蛐兒兒
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2018-07-04 10:03:37
4樓2018-07-04 10:22:55
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