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關(guān)于桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的一些問(wèn)題？ 已有1人參與
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關(guān)于桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的一些問(wèn)題？ 1.如果我不測(cè)滴度的話，按照理論P(yáng)3滴度是不是大于1X108了，那么我表達(dá)蛋白的時(shí)候能不能就按照1X108，MOI值5 來(lái)計(jì)算病毒加入的量，這樣對(duì)表達(dá)量影響大么？ 2.收菌的時(shí)間是48-72h,72h的時(shí)候已經(jīng)有一些細(xì)胞破碎了，細(xì)胞活力在70-80%，我看手冊(cè)上說(shuō)，“Harvest the virus when 70–80% of cells are dead”是不是說(shuō)收獲的時(shí)候細(xì)胞活力只有20%，那豈不是很多細(xì)胞都破碎了，蛋白不就被降解了么？文獻(xiàn)又有說(shuō)細(xì)胞活力在90%的時(shí)候收，所以我就很困惑，什么時(shí)間收比較好 3.表達(dá)后，菌液高壓破碎后特別稠，堵柱子，流過(guò)液中也有目的蛋白（帶6個(gè)His-tag），感覺(jué)不掛柱，純化的時(shí)候洗了好多梯度，蛋白還是很雜。 小白入門(mén)，求大神指點(diǎn) |
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圣混沌凡
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2樓2018-07-24 23:20:10
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7樓2018-11-27 21:39:33
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8樓2019-10-09 12:27:37
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